胎牛血清作為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中的關(guān)鍵組分之一,在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中占據(jù)重要地位。胎牛血清是在封閉的屠宰機(jī)構(gòu)對未發(fā)育完全的胎牛的心臟穿刺取血而獲取的牛血清制品,牛血清制品隨著取血對象的年齡變化可分為胎牛血清,新生牛血清以及(成年)牛血清,血清的成分及含量會(huì)隨年齡變化。而胎牛血清由于血清采集時(shí)間早,其胎球蛋白較多,并富含多種生長因子。同時(shí),由于未接觸外界環(huán)境,胎牛血清所含的內(nèi)有毒的、補(bǔ)體等細(xì)胞有害成分和抗體水平均是較低的。因此,胎牛血清從細(xì)胞培養(yǎng)的效果來看是較為很好的牛血清制品,在細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用較為較廣。胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。黃山優(yōu)等胎牛血清哪里有
胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)較為高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分較為少。胎牛血清:性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體;蛋白質(zhì)含量:3.5%~5.0%( w/v);血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v);無菌檢驗(yàn):陰性;支原體檢驗(yàn): 陰性;細(xì)菌內(nèi)有毒的 ≤5(EU/ml);牛腹瀉病毒:陰性;大腸桿菌噬菌體:陰性。黃山優(yōu)等胎牛血清哪里有胎牛血清提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。
小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng)?來源不同:胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。血清保存和使用須注意:血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個(gè)月。解凍血清時(shí) ,應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,并經(jīng)常搖勻使之溶解,然后至室溫放置使之升溫,一定不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顏色加深,粘稠度也會(huì)增加,血清在解凍和熱滅活后,應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
血清的保存應(yīng)該注意:血清中的沉淀物、絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量,可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理,顯微鏡下"小黑點(diǎn)"。經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會(huì)明顯增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點(diǎn)",常誤認(rèn)為血清受污染,一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的血清。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破壞而影響血清質(zhì)量。血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物。
如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:解凍血清時(shí),請隨時(shí)將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。血清分裝凍存時(shí),須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。勿將血清置于37℃太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會(huì)因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過高,時(shí)間過久或搖晃不均勻,都會(huì)造成沉淀物的增多。胎牛血清提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。宿遷標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清品牌
血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年。黃山優(yōu)等胎牛血清哪里有
血清的保存應(yīng)該注意:需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月,由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。黃山優(yōu)等胎牛血清哪里有