試劑篇：GST親和純化原理GST親和層析是利用GST融合蛋白與固定的谷胱甘肽(GSH)通過硫鍵共價(jià)親和，通過GSH交換洗脫的原理來進(jìn)行純化。該純化柱中，凝膠手臂上通過硫鍵結(jié)合一個(gè)谷胱甘肽。然后利用谷胱甘肽與谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶（即GST-tag（26KDa））之間酶和底物的特異性作用力，使得帶GST標(biāo)簽的融合蛋白能夠與凝膠上的手臂谷胱甘肽結(jié)合，從而將帶標(biāo)簽的蛋白與其他蛋白分離開。谷胱甘肽通常有氧化型GSSG和還原型GSH，當(dāng)我們使用GSH洗脫時(shí)，GSH會(huì)與凝膠上的谷胱甘肽競爭結(jié)合融合蛋白，從而將目標(biāo)蛋白洗脫。GST標(biāo)簽蛋白可直接從細(xì)菌裂解液中利用含有還原型谷胱甘肽瓊脂糖凝膠(Glutathionesepharose)親和樹脂進(jìn)行純化。GST標(biāo)簽蛋白可在溫和、非變性條件下洗脫，因此保留了蛋白的抗原性和生物活性。GST在變性條件下會(huì)失去對谷胱甘肽樹脂的結(jié)合能力，因此不能在純化緩沖液中加入強(qiáng)變性劑如：鹽酸胍或尿素等。如果蛋白表達(dá)在包涵體中，可復(fù)性后再純化。此外要去除GST標(biāo)簽，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。GFP,YFP,RFP標(biāo)簽純化方案。廣東離子交換試劑純化流程
蛋白純化試劑-ECL魯米諾化學(xué)發(fā)光試劑盒本產(chǎn)品是基于魯米諾底物的化學(xué)發(fā)光試劑盒，能夠被辣根過氧化物酶（HRP）催化發(fā)光。本試劑盒優(yōu)化了底物組成，使用了新型高效增強(qiáng)劑，發(fā)光強(qiáng)度比傳統(tǒng)ECL顯色液提高了30-100倍，并有效地降低了背景。試劑盒使用新的氧化劑代替不穩(wěn)定的雙氧水，提高了試劑盒的穩(wěn)定性，室溫可穩(wěn)定放置1年。工作液被HRP催化后，發(fā)出特定波長熒光（400-450nm），可對X光膠片曝光，也可直接使用熒光CCD掃描，主要應(yīng)用于Western檢測以及化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)江蘇磁珠系列試劑代理銷售價(jià)格如何純化楚純度更高的樣品？
蛋白純化試劑Ni Smart Beads純化流程2/3常州天地人和生物科技有限公司平衡液：20mM磷酸鹽，0.5MNaCl，pH7.4洗雜液：20mM磷酸鹽，0.5MNaCl，0-5mM咪唑，pH7.4洗脫液：20mM磷酸鹽，0.5MNaCl，250mM咪唑，pH7.4注：為了減少宿主細(xì)胞蛋白的洗脫，建議在洗雜液中加入低濃度的咪唑。為了消除一些離子作用蛋白的吸附，可以在溶液中加入0.5M-1.0MNaCl。可以采用低pH值洗脫或與咪唑結(jié)合，如pH2.5-5.0。2.2樣品準(zhǔn)備1)將細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心杯，7,000rpm(7,500×g)，離心15min取上清。如果使用預(yù)裝柱，樣品在使用前比較好用0.22μm或者0.45μm濾膜過濾除菌。2)樣品中含有可耐受范圍內(nèi)試劑，不需要透析或濃縮，可以直接上樣。2.3樣品純化流程1)將NiSmartBeads裝入合適的層析柱，層析用5倍柱體積的平衡液進(jìn)行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。2)將樣品加到平衡好的NiSmartBeads中，保證目的蛋白與Ni2+充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液。3)用10-15倍柱體積的洗雜液進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。4)使用5-10倍柱體積的洗脫液，收集洗脫液，即目的蛋白組分。
蛋白純化試劑 Dextrin Beads 6FF是一種純化帶有麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）標(biāo)簽蛋白的親和層析介質(zhì)，具體性能見表1。MBP可促進(jìn)連接蛋白的正確折疊，增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真**白。Dextrin Beads 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結(jié)合的融合蛋白可以用10mM麥芽糖進(jìn)行溫和洗脫，保護(hù)了標(biāo)簽蛋白的活性。如果要去除MBP融合部分可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。問題及解決方案柱子反壓過高 填料被堵塞按照第3部分進(jìn)行樹脂清洗。裂解液中含有微小的固體顆粒，建議上柱前使用濾膜 (0.22或 0.45μm) 過濾，或者離心去除。目的蛋白沒有吸附目的蛋白未表達(dá)確保目的蛋白表達(dá)樣品或緩沖液中存在一些干擾因素如非離子去污劑樣品透析或用平衡液稀釋細(xì)胞產(chǎn)生大量的淀粉酶影響結(jié)合力培養(yǎng)基中添加葡萄糖，抑制淀粉酶的表達(dá)融合蛋白使麥芽糖結(jié)合位點(diǎn)阻塞或扭曲，影響了目的蛋白的結(jié)合力更換載體柱子結(jié)合時(shí)間太短將樣品與Dextrin Beads 6FF振蕩孵育4度2小時(shí)或更長時(shí)間洗脫樣品較雜目的蛋白降解加一些蛋白酶抑制劑，如PMSF、EDTA等平衡/洗雜不充分增加平衡液體積，確保樹脂充分平衡/洗雜，如樹脂太臟按照第3部分進(jìn)行樹脂清洗。純化糖蛋白，膜蛋白，糖脂，多糖，脂蛋白等。
Ni NTA Beads是以4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過化學(xué)方法偶聯(lián)了四配位的氮川三乙酸（NTA），螯合鎳離子（Ni2+）后，可以形成非常穩(wěn)定的八面體結(jié)構(gòu)，鎳離子處于八面體的中心，這樣的結(jié)構(gòu)很有效的保護(hù)了鎳離子免受小分子的進(jìn)攻（產(chǎn)品結(jié)構(gòu)見圖1所示，三種產(chǎn)品結(jié)構(gòu)的區(qū)別），更加穩(wěn)定，具體性能見表1。Ni NTA Beads可以耐受一定濃度的還原劑、變性劑或耦合劑等苛刻條件（見表2），適用性更廣，配體更穩(wěn)定，選擇性更高。 選蛋白純化試劑iu選上海楚知-天地人和脫鹽柱產(chǎn)品哪一家的好?廣東定制試劑報(bào)價(jià)
較低的蛋白非特異性吸附。廣東離子交換試劑純化流程
蛋白純化試劑純化流程5)依次使用3倍柱體積的平衡液和5倍柱體積的去離子水平衡填料，***再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4-30°C保存，防止填料被細(xì)菌污染。2.4SDS-PAGE檢測將使用純化產(chǎn)品得到的樣品（包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品使用SDS-PAGE檢測純化效果。3.在位清洗當(dāng)填料使用過程中發(fā)現(xiàn)反壓過高或者填料上面出現(xiàn)明顯的污染時(shí)，需要進(jìn)行在位清洗操作（Cleaning-in-Place，CIP）。建議按照下面操作去除填料上殘留的污染物，如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。去除強(qiáng)疏水結(jié)合的蛋白，脂蛋白和脂類通過使用30%異丙醇清洗5-10個(gè)柱體積，接觸時(shí)間為15-20分鐘可以去除此類污染物。然后，再使用10倍柱體積的去離子水清洗。也可以選擇使用含有去污劑的酸性或堿性溶液，清洗填料2倍柱體積。例如，含有0.1–0.5%非離子去污劑的0.1M醋酸溶液，接觸時(shí)間為1–2小時(shí)。去污劑處理后，需要使用70%的乙醇清洗5個(gè)柱體積，以徹底去除去污劑。***使用10倍柱體積的去離子水清洗。廣東離子交換試劑純化流程
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