OglyZOR 來源于口腔鏈球菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 227 kDa。SialEXO來源于Akkermansia muciniphila,在大腸桿菌中表達。SialEXO酶含有His標簽,組分的分子量分別為42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶;2. 降低樣品異質(zhì)性,揭示潛在的關(guān)鍵蛋白質(zhì)修飾;3. 完全、穩(wěn)健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的凍干酶,用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 個單位的小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助劑才能發(fā)揮作用,因此與2000單位的SialEXO凍干一起提供。FucoseEXO固定在離心柱中,可快速方便地處理高達0.5mg的糖蛋白,然后在離心步驟中輕松收集消化的糖蛋白。凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)
在這里,Genovis分析了 C1 抑制劑——一種人血漿衍生的生物zhiliao藥物,由 6 種 N-聚糖和多達 28 種 O-聚糖修飾,主要由唾液酸he心 1 結(jié)構(gòu)組成。在不對這種高度異質(zhì)的蛋白質(zhì)進行任何預(yù)處理的情況下,反相LC-MS分析產(chǎn)生了無法詳細解釋的復(fù)雜質(zhì)譜圖。在天然條件下使用OmniGLYZOR Microspin色譜柱,可在3小時內(nèi)有效去除所有O-聚糖。然而,蛋白質(zhì)上仍殘留著 1 到 3 個 N-聚糖。使用凍干的PNGase F和OmniGLYZOR試劑盒中包含的MS友好型RapiGest? SF表面活性劑*,在變性條件下通過額外的去糖基化步驟去除這些不可接近的N-聚糖。觀察到所有聚糖的完全去除,但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不會從變性中獲益,這就是為什么OmniGLYZOR Microspin色譜柱只能在非變性條件下使用的原因。湖北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶而用其他巖藻糖酶處理部分去除巖藻糖或根本沒有去除。
Genovis 集團由瑞典 Genovis AB 和美國全資子公司 Genovis Inc. 組成。該公司的在納斯達克北方增長市場上市。如需了解更多信息,請訪問投資者關(guān)系。 Genovis的經(jīng)營理念是為生物制藥和研究行業(yè)的客戶提供工具,以促進和節(jié)省開發(fā)新治療方法和診斷的時間。Genovis 酶產(chǎn)品,稱為 SmartEnzymes,被世界各地的科學(xué)家使用,創(chuàng)新的產(chǎn)品形式促進了生物藥物的開發(fā)和質(zhì)量控制。 通過在2020年收購QED Bioscience,產(chǎn)品組合已擴大到包括用于研究、生物藥物開發(fā)和診斷檢測的抗體和試劑。在 網(wǎng)站 上閱讀有關(guān)QED的更多信息 Genovis 研發(fā)活動的基石是客戶關(guān)系,使產(chǎn)品開發(fā)能夠滿足客戶需求。與專注于表征新酶、開發(fā)新工作流程和新靶點抗體的學(xué)術(shù)團體的合作同樣有價值。
蛋白質(zhì)的N-糖基化特征是一個關(guān)鍵的質(zhì)量屬性。它會影響生物制藥的安全性和有效性,因此需要在開發(fā)和生產(chǎn)過程中進行表征和監(jiān)測。常見的聚糖分析工作流程是用PNGase F釋放N-聚糖,然后用熒光標記物(如2-AB、2-AA、普魯卡因胺或RapiFluor-MS?(沃特世公司))標記生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛細管電泳分離標記的聚糖,以表征和定量不同的聚糖結(jié)構(gòu)。 在這里,使用游離聚糖方法分析zhiliao性抗體曲妥珠單抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。曲妥珠單抗和依那西普在天然條件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小時,而RNase B需要變性和還原才能完全去糖基化。因此,在50°C下用PNGase F去糖基化10分鐘之前,用RapiGest? SF表面活性劑(沃特世公司)和TCEP處理RNase B。 用RapiFluor-MS標記所得游離的聚糖,并通過HILIC UPLC-FLD-MS進行分析。FucosEXO酶在大腸桿菌中表達,帶有His標簽,分子量為87 kDa和64 kDa,在6至8的pH值范圍內(nèi)顯示出高活性。
Fc N-聚糖在抗體的效應(yīng)功能中起著至關(guān)重要的作用,但可能會增加蛋白質(zhì)表征測定的復(fù)雜性。在天然條件下用PNGase F去除Fc N-糖可以表征游離N-糖以及去糖基化抗體的功能和結(jié)構(gòu)。 為了證明PNGase F固定化和PNGase F凍干在天然反應(yīng)條件下有效去除Fc N-聚糖,對zhiliao性抗體曲妥珠單抗進行了處理。圖2中的質(zhì)量數(shù)偏移表明,在37°C下用Genovis的PNGase F凍干或PNGase F固定化孵育1小時后,曲妥珠單抗上的Fc N-聚糖成功去除,與在溶液中用PNGase F凍干處理的樣品相比,沒有酶干擾用PNGase F固定處理的樣品的分析。N-聚糖在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)zhong共翻譯地連接到未折疊的蛋白質(zhì)上;重慶固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)
評價抗體片段對完整蛋白聚集的影響:可使用Genovis的IgdE酶(FabALACTICA?)和PNGaseF酶。凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)
生成攜帶 O-糖的糖肽,該酶可實現(xiàn) O-糖譜分析、O-糖肽圖譜和位點占用測定,以及使用 MS 分析的中級方法。1.可靠O-聚糖特異性蛋白酶 – 消化絲氨酸/蘇氨酸糖基化位點的 N 末端;2.穩(wěn)健的消化,增強復(fù)雜生物制藥的表征;3.高特異性 - 可靠的聚糖位點測定和定位。Genovis的OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化攜帶he心1 O-聚糖的蛋白質(zhì),糖基化(he心 1)Ser 和 Thr 殘基的 N 端。OpeRATOR 來源于 Akkermansia muciniphila,并以 E 表達。大腸桿菌。該酶含有 His 標簽,分子量為 42 kDa。SialEXO 來源于 Akkermansia muciniphila,并以 E 表達。大腸桿菌。SialEXO Lyophilized 中的酶也含有 His 標簽,這些組分的分子量分別為 43 kDa 和 66 kDa。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽的凍干酶。Genovis的OpeRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在 2000 個單位的小瓶中,用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)