Genovis將固定化酶固定在磁珠上，用于在鉸鏈下方自動消化IgG。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體，產生均質的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORMagIC磁珠含有FabRICATOR固定化酶。這些微球能夠在中級表征工作流程中并行快速自動酶解多種抗體。它們專為自動化平臺而設計，但在無法實現自動化的情況下，在振動臺上的表現同樣出色。酶切消解后，樣品可直接轉移到LC-MS的自動進樣器進行快速色譜分析，或轉移到其他分析方法進行分析。自動平行抗體酶切和亞基生成允許處理與克隆選擇、工藝開發(fā)和潛在生物制藥穩(wěn)定性研究相關的大量樣品。自動抗體亞基分析可減少操作人員的時間和樣品處理錯誤的風險，并提高通量。Genovis已經測試了 PBS 和 150 mM 醋酸銨，并且也適用于FabRICATOR HPLC。江西FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS）試劑盒可消化兔 IgG，但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段，您需要另一種填料，而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對處理兔IgG感興趣，請聯系Genovis團隊，我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡單性、速度和可重復性也意味著這種酶可以被用于質量控制應用。 QC方法需要執(zhí)行簡單，易于訓練，高度可重復，數據易于分析，這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因為它適用于一系列不同的IgG，這也意味著使用FabRICATOR進行QC工作的客戶將能夠在未來的產品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。江西FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學用 Genovis的GlySERIAS Immobilized消化Romiplostim，產生均質的 Fc/2。

Genovis的FabRICATOR（IdeS）是一種獨特的酶，可在鉸鏈區(qū)域下方的特定位點消化IgG，產生均勻的F（ab'）2和Fc/2片段。除IgG外，沒有其他底物是已知的。IgG在30分鐘內消化，如果孵育時間延長，則不存在過度消化的風險。由于FabRICATOR在生理反應條件下消化IgG，因此保留了免疫反應性。在37°C下獲得良好的活性，但也可以在室溫下使用較長的反應時間進行消解。FabRICATOR可消化人類的所有亞類以及猴子、兔子和綿羊IgG的某些亞類。它對小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-為了消化這些抗體物種，我們建議使用FabRICATORZ。FabRICATOR是從化膿性鏈球菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽，分子量為37725Da。FabRICATOR是IdeS的重組修飾形式，由GenovisAB開發(fā)，用于需要高標準和一致性的生物技術應用。有一種檢測FabRICATOR酶的方法。了解有關山羊多克隆抗體Anti-FabRICATOR的更多信息。

為了讓所有實驗室都能同時快速自動消化多種抗體，Genovis的FabRICATORMagIC的設計具有靈活性，適用于一系列自動化平臺。我們在ThermoScientific?KingFisher?純化系統(tǒng)上優(yōu)化了FabRICATORMagIC的工作流程，但它可以轉移到其他自動化平臺，如果沒有自動化，在振動臺上也能同樣出色地工作。消解后，將含有處理樣品的深孔板直接轉移到LC-MS的自動進樣器中進行快速色譜分析，或轉移到其他分析方法進行分析。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容，以極大限度地減少自動化系統(tǒng)中可能發(fā)生的純粹壓力。使用KingFisher儀器處理樣品時，樣品制備非常簡單。將樣品、樹脂和緩沖液移液到指定的孔或板中，然后將板放入儀器中。設計用于FabRICATORMagIC的BindIt?協(xié)議將控制每個步驟的孵育溫度和時間。Genovis發(fā)現大部分緩沖液與FabRICATOR活性兼容，已經測試了PBS和150mM 醋酸銨 pH7，也適用于FabRICATOR HPLC。

Genovis的FabRICATOR MagIC自動樣品制備可用于分析和監(jiān)測不同的CQA。mAb在生產或儲存過程中的氧化就是這樣一種CQA，可能會影響zhiliao產品的質量。為了展示FabRICATOR MagIC如何解決這個問題，對6種mAb的混合物進行強制降解（室溫下3個月），并通過反相LC-MS進行分析。當在完整水平上分析mAb時，可以檢測到mAb5豐度的顯著差異，同時出現許多新的峰。然而，無法獲得可靠的質量數據。使用FabRICATOR MagIC，mAb5變化的來源在Fab區(qū)域內。隨后還原為 Fc/2、LC 和 Fd' 片段，可以識別差異是由于 mAb5 Fd' 片段上的色氨酸氧化，通過形成氧代內酯 （+14 Da） 和二氧代內酯 （+30 Da） 以及 mAb5 LC （-18 Da） 的琥珀酰亞胺化來揭示。此外，還可檢測到mAb3輕鏈的異構化。該示例說明了FabRICATOR MagIC在mAb中級分析中的強大功能，它創(chuàng)建的片段足夠小，可以精確定位特定的修飾，而無需耗時耗費資源的肽圖分析，所有這些都以相對較少的手動操作時間快速完成。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統(tǒng)酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細優(yōu)化，降低多個消化位點的風險。GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學

IgASAP Sub1 的消化位點位于該擴展區(qū)域，使IgASAP酶具有 IgA1 特異性。江西FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學

與IdeS不同，Romiplostim 由四個相同的血小板生成素 （TPO） 受體結合肽和一個 Fc 片段組成，通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜，或用 GlySERIAS 凍干 1 小時并在 37°C 下過夜消化該蛋白質。 鏈間二硫鍵被還原，以便于通過反相LC-MS進行以下分析。與度拉糖肽的觀察結果類似，用固定化酶消化產生均質的 Fc/2，剩下一個連接子殘基，此處為甘氨酸殘基。這有助于識別專門位于Fc區(qū)域的修改。用凍干酶消化 1 小時得到 Fc/2，剩余 4 個甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個 TPO 肽連接。另一方面，這使得研究 Fc/2 和第yi個肽之間的連接區(qū)域成為可能，而不會受到第二個肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產生 2 個 Fc/2 變體，分別剩下 4 個和 1 個甘氨酸殘基。根據消化時間的不同，使用凍干產物釋放的肽以五或七種變體存在，接頭中殘留的甘氨酸殘基數量不同，而使用固定化產物釋放的肽以四種變體存在。江西FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學