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遼寧GingisKHANIdeS蛋白酶

來源: 發(fā)布時間:2024-09-19

Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)與IdeS酶一樣是特異性蛋白酶。在二維核磁共振波譜 (2D-NMR) 之后,可以通過 HOS 分析在精確的原子水平上評估 mAb 的關鍵質量屬性。從Genovis的FabALACTICA Immobilized獲得均相Fab和Fc片段的工作流程,是評估嵌合單克隆抗體英夫利昔單抗中HOS的理想選擇,在海報“FabALACTICA產(chǎn)生純和均相的mAb亞基,促進2D-NMR波譜分析”中進行了描述。來自生成的 Fab 和 Fc 片段的高質量信號和光譜分辨率導致能夠觀察 Fab 和 Fc 之間的結構變化、氧化和非氧化樣品之間的差異,并通過觀察原子分辨率來比較原研劑和生物仿制藥的 HOS。在抗體藥及核酸藥領域,倍篤生物產(chǎn)品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程,抗體結構域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶。遼寧GingisKHANIdeS蛋白酶

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為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR(IdeS)。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現(xiàn)出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優(yōu)勢是速度。在大多數(shù)IgG上,您可以在短短30分鐘內(nèi)生成F(ab’)2和Fc/2片段,這一速度簡化了方法開發(fā),并允許快速有效的中層表征,使客戶能夠在不比做完整質量實驗長太多的時間內(nèi)獲得更多關于分子的信息。Genovis發(fā)現(xiàn)更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容(更多信息)。Genovis已經(jīng)測試了PBS和150mM醋酸銨,pH7,結果良好。并且應該也適用于FabRICATORHPLC。然而,緩沖液的離子強度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC(IdeS)色譜柱上的保留,并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進行一些優(yōu)化。河南FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶Genovis將固定化酶固定在磁珠上,用于在鉸鏈下方自動消化 IgG。

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一些應用(如結合研究)具有高度靈敏度,因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此,Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供,可快速輕松地生成均質 F(ab')2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR (IdeS),用于制備來自多種 IgG 的 F(ab')2 和 Fc 片段(對于兔 IgG,請咨詢),而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進行處理 。 為了生成和純化完整的 F(ab')2 和 Fc/2 片段,使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗,并通過 SDS-page 進行分析。首先,在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘,然后進行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F(ab')2 片段,并通過降低 pH 值,然后立即調(diào)整回中性 pH 值,一步洗脫結合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過程大約需要 1 小時

Genovis除了提供IdeS酶以外,還提供很多種特異性蛋白酶,如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)。IgdE 在鉸鏈正上方的一個特定位點消化人 IgG1,產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段的均質池。它在pH值和鹽濃度范圍內(nèi)具有活性,不需要任何還原劑或輔助因子。因此,與許多其他常用的蛋白酶相比,F(xiàn)abALACTICA不需要任何優(yōu)化來避免過度消化。這使得FabALACTICA成為一種有吸引力的酶,例如在還原和非還原條件下的LC-MS分析、抗體高階結構(HOS)的結晶和NMR研究、雙特異性或多特異性抗體的表征、單價結合研究和完整的Fc聚糖分析。有效消化,適用于靈敏的體內(nèi)或基于細胞的檢測。

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抗體的氧化是可能影響抗體功能的關鍵質量屬性,需要密切定量和表征。它可能導致mAb的體內(nèi)半衰期、功效和穩(wěn)定性降低。Genovis的FabRICATOR(IdeS)消化產(chǎn)生的抗體亞基是研究抗體氧化的理想選擇。酶解的穩(wěn)健性允許在受監(jiān)管的環(huán)境中監(jiān)測抗體亞基氧化。Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體,產(chǎn)生均質的F(ab')2和Fc片段。該酶用于基于抗體的療法(如mAb、ADC、生物類似藥和Fc融合蛋白)的表征、質量控制、穩(wěn)定性測試、生產(chǎn)監(jiān)測和克隆選擇。高度特異性-鉸鏈下方的一個消化位點快速–在30分鐘內(nèi)生成均勻的片段池實現(xiàn)基于抗體的生物zhiliao藥物的表征和質量控制可固定在即用型離心柱中為Fc聚糖分析提供了一種快速、直接的、自動化,高通量的替代方法。福建FabDELLOIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

自動抗體亞基分析可減少操作人員的時間和樣品處理錯誤的風險,并提高通量。遼寧GingisKHANIdeS蛋白酶

作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分,IgA在自身免疫性疾病、過敏反應、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發(fā)揮作用。在天然條件和復雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫(yī)學和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結構差異是鉸鏈區(qū)域。與IgA2相比,IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區(qū)域。IgASAPSub1的消化位點位于該擴展區(qū)域,使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在,A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和纈氨酸(V)之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區(qū)域,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸(R)殘基取代,因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性。遼寧GingisKHANIdeS蛋白酶

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