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廣東FabALACTICAIdeS蛋白酶

來源: 發(fā)布時間:2024-05-20

與IdeS不同,Genovis的GlySERIAS是一種獨特的酶,可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子,例如Gly4Ser和GlyxSery(GS)以及聚甘氨酸(G)接頭。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個結(jié)構(gòu)域,以促進(jìn)表征并增加對這些分子的理解。融合蛋白的中級分析既可以降低整體樣品的復(fù)雜性,又可以對翻譯后修飾進(jìn)行結(jié)構(gòu)域特異性鑒定和監(jiān)測。為了改善連接子的去除,Genovis建議使用GlySERIASImmobilized。對于連接子表征,我們推薦GlySERIAS凍干。具有柔性接頭的獨特酶消化融合蛋白;中級方法可降低融合蛋白表征的復(fù)雜性;復(fù)雜融合蛋白的可靠且可重復(fù)的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和絲氨酸殘基的重復(fù)序列組成的柔性連接子。該酶在天然反應(yīng)條件下具有活性,能夠?qū)?fù)雜的融合蛋白進(jìn)行中級表征。連接子區(qū)域同時在多個位點被消化,導(dǎo)致先前連接的組分分離?;钚园l(fā)生在pH7.6下,孵育時間可以根據(jù)所需的產(chǎn)物而變化。GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來的,在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽,分子量為18kDa。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復(fù)雜性并明顯簡化IgA分析表征的寶貴工具。廣東FabALACTICAIdeS蛋白酶

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抗體 Fc 糖基化譜是一種重要的 CQA,因為它會影響療效、和免疫原性。因此,需要從早期開發(fā)、工藝開發(fā)到質(zhì)量控制和批量放行的整個過程對Fc聚糖譜進(jìn)行監(jiān)測。傳統(tǒng)的分析方法基于對游離的聚糖進(jìn)行熒光標(biāo)記,然后通過HILIC-HPLC或CE進(jìn)行分析,這需要多步驟的樣品制備方案,這需要大量的時間和資源。使用Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb,然后使用LC-MS進(jìn)行中級分析,為Fc聚糖分析提供了一種快速、直接的替代方法。如上所示,它很容易實現(xiàn)自動化,以提高通量并降低處理錯誤的風(fēng)險。吉林GlySERIASIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)Genovis 酶產(chǎn)品,被世界各地的科學(xué)家使用,創(chuàng)新的產(chǎn)品形式促進(jìn)了生物藥物的開發(fā)和質(zhì)量控制。

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蛋白酶用于生成肽,用于質(zhì)譜分析蛋白質(zhì)。這些應(yīng)用包括蛋白質(zhì)組學(xué)和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導(dǎo)的偽影,傳統(tǒng)的蛋白酶并不總是理想的,因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶,可將蛋白質(zhì) C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比,所得肽更長,并可能導(dǎo)致序列覆蓋率增加。質(zhì)譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質(zhì)量的數(shù)據(jù)集和避免復(fù)雜的數(shù)據(jù)解釋至關(guān)重要。作為模型底物,使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質(zhì)譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性,即使在長時間孵育過夜后,酶與底物的比例也很高(1:5)。然而,ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性,但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1:20 和過夜孵育下,證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下,GingisREX未檢測到這種情況。數(shù)據(jù)證實了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性,并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。

Genovis除了提供IdeS酶以外,還提供很多種特異性蛋白酶,如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)。IgdE 在鉸鏈正上方的一個特定位點消化人 IgG1,產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段的均質(zhì)池。它在pH值和鹽濃度范圍內(nèi)具有活性,不需要任何還原劑或輔助因子。因此,與許多其他常用的蛋白酶相比,F(xiàn)abALACTICA不需要任何優(yōu)化來避免過度消化。這使得FabALACTICA成為一種有吸引力的酶,例如在還原和非還原條件下的LC-MS分析、抗體高階結(jié)構(gòu)(HOS)的結(jié)晶和NMR研究、雙特異性或多特異性抗體的表征、單價結(jié)合研究和完整的Fc聚糖分析。消化在1小時內(nèi)完成,且具有特異性。即使孵育時間延長,也沒有過度消化的風(fēng)險。

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作為免疫系統(tǒng)的重要組成部分,IgA在自身免疫性疾病、過敏反應(yīng)、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發(fā)揮作用。在天然條件和復(fù)雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫(yī)學(xué)和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復(fù)雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結(jié)構(gòu)差異是鉸鏈區(qū)域。與IgA2相比,IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區(qū)域。IgASAPSub1的消化位點位于該擴(kuò)展區(qū)域,使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在,A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和纈氨酸(V)之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區(qū)域,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸(R)殘基取代,因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性。Genovis的策略是幫助客戶進(jìn)行亞基分析,特別是我們的蛋白質(zhì)酶切產(chǎn)品,如IdeS蛋白酶。河南FabRICATOR ZIdeS蛋白酶抗體酶切

IgASAP Sub1 可水解分泌物和血清 IgA1。廣東FabALACTICAIdeS蛋白酶

與IdeS不同,融合蛋白是通過將兩種或多種蛋白質(zhì)或肽的功能組合成一個量身定制的分子來創(chuàng)造的,以專門應(yīng)對挑戰(zhàn)。連接此類蛋白質(zhì)或肽結(jié)構(gòu)域的常見方法是包含柔性連接子。這些連接子通常富含甘氨酸,例如甘氨酸殘基(G),或甘氨酸殘基散布絲氨酸殘基(GS)以形成重復(fù)序列。這為連接子提供了足夠的靈活性,不會干擾連接蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域的功能。然而,這些新模式帶來了新的分析挑戰(zhàn),需要新的工具來促進(jìn)表征和產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測。中級分析已成為分析單克隆抗體療法的標(biāo)準(zhǔn)方法,涉及將分子消化成幾個定義的亞基。它們足夠小,可以獲得高質(zhì)量的質(zhì)譜圖,并為產(chǎn)品質(zhì)量屬性提供特定領(lǐng)域的信息。由于G和GS連接子對常見蛋白酶的降解具有抗性,因此很難分離結(jié)構(gòu)域以進(jìn)行深入分析。因此,Genovis開發(fā)了GlySERIAS,不同于IdeS酶,一種消化柔性富含甘氨酸的連接子的酶。GlySERIAS可以分離不同的功能域,并實現(xiàn)對融合蛋白、多特異性抗體和含有富含甘氨酸的連接子的各種mAb片段進(jìn)行詳細(xì)表征的中級方法。廣東FabALACTICAIdeS蛋白酶

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