與IdeS不同。Genovis的IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1,產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAPSub1可水解分泌物和血清IgA1。消化在1小時內(nèi)完成,并且由于酶的特異性,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風(fēng)險。該酶在pH值6.5至8.0下具有活性,不需要還原條件或輔助因子即可發(fā)揮活性。活性是在37°C下,但也可以在室溫下使用增加孵育時間進(jìn)行消化。IgASAPSub1是從口腔鏈球菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽,分子量為148kDa。IgASAPSub1凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在1000個單位的小瓶中,用于消化1mgIgA1。通過將酶偶聯(lián)到樹脂上,可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率,從而可以進(jìn)一步加速反應(yīng),以獲得更完整的蛋白質(zhì)的消化。山東FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)
Genovis的FabRICATOR(IdeS)是一種獨特的酶,可在鉸鏈區(qū)域下方的特定位點消化IgG,產(chǎn)生均勻的F(ab')2和Fc/2片段。除IgG外,沒有其他底物是已知的。IgG在30分鐘內(nèi)消化,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風(fēng)險。由于FabRICATOR在生理反應(yīng)條件下消化IgG,因此保留了免疫反應(yīng)性。在37°C下獲得良好的活性,但也可以在室溫下使用較長的反應(yīng)時間進(jìn)行消解。FabRICATOR可消化人類的所有亞類以及猴子、兔子和綿羊IgG的某些亞類。它對小鼠IgG2a和IgG3的活性有限-為了消化這些抗體物種,我們建議使用FabRICATORZ。FabRICATOR是從化膿性鏈球菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽,分子量為37725Da。FabRICATOR是IdeS的重組修飾形式,由GenovisAB開發(fā),用于需要高標(biāo)準(zhǔn)和一致性的生物技術(shù)應(yīng)用。有一種檢測FabRICATOR酶的方法。了解有關(guān)山羊多克隆抗體Anti-FabRICATOR的更多信息。河南GlySERIASIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶Genovis的FabRICATOR MagIC酶解mAb,使用LC-MS進(jìn)行中級分析。
在抗體藥物及核酸藥物領(lǐng)域,倍篤生物產(chǎn)品線涵蓋藥物研發(fā)的全流程,主要用——RNA轉(zhuǎn)染試劑、生物活性物質(zhì)純化分離用填料產(chǎn)品、ADC的payload抗體(如anti-DXD、anti-Eribulin、anti-MMAE等)、動物造模用陽性及陰性抗體、泊洛沙姆P 188 Bio、工藝雜質(zhì)及外源污染物殘留檢測產(chǎn)品、抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等,品牌有瑞典Genovis、德國BASF、美國QED、中國君研生物、中國金傳生物、中國毫厘科技、中國再帆生物等。這些國產(chǎn)品牌都具有國內(nèi)自研、自產(chǎn)能力,批次生產(chǎn)穩(wěn)定可靠、品質(zhì)可控,為行業(yè)發(fā)展提供更多國產(chǎn)選擇。
為了讓所有實驗室都能同時快速自動消化多種抗體,Genovis的FabRICATORMagIC的設(shè)計具有靈活性,適用于一系列自動化平臺。我們在ThermoScientific?KingFisher?純化系統(tǒng)上優(yōu)化了FabRICATORMagIC的工作流程,但它可以轉(zhuǎn)移到其他自動化平臺,如果沒有自動化,在振動臺上也能同樣出色地工作。消解后,將含有處理樣品的深孔板直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動進(jìn)樣器中進(jìn)行快速色譜分析,或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進(jìn)行分析。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容,以極大限度地減少自動化系統(tǒng)中可能發(fā)生的純粹壓力。使用KingFisher儀器處理樣品時,樣品制備非常簡單。將樣品、樹脂和緩沖液移液到指定的孔或板中,然后將板放入儀器中。設(shè)計用于FabRICATORMagIC的BindIt?協(xié)議將控制每個步驟的孵育溫度和時間。GingisKHAN Fab Kit進(jìn)行人IgG1(如曲妥珠單抗)的消化和抗體片段的后續(xù)純化。
與IdeS不同,Genovis的GingisREX(RgpB)是一種精氨酸特異性蛋白酶,可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質(zhì),包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化;在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化;產(chǎn)生更長的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶,可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基,包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比,可生成更長的肽,胰蛋白酶消化可以通過高分辨率質(zhì)譜進(jìn)行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇,以實現(xiàn)替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒有活性,通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內(nèi)具有活性,它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。IgASAP Sub1+2 在脯氨酸 (P) 和纈氨酸 (V) 之間消化 IgA1 和 IgA2m1。吉林FabULOUSIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶
可使用FabULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。山東FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)
對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應(yīng)用,需要在抗體鉸鏈處進(jìn)行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統(tǒng)酶可用于生成 Fab 片段,但非特異性酶活性需要仔細(xì)優(yōu)化,以極大限度地降低多個消化位點的風(fēng)險。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個消化位點,可從人 IgG1 生成均質(zhì)的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu) (HOS) 的 NMR 研究、結(jié)合研究等。在這里,我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化,用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結(jié)構(gòu)域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊,因此在變性條件下特異性受到負(fù)面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率,在加入SDS上樣緩沖液之前,停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應(yīng)。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。山東FabRICATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)