Genovis將固定化酶固定在磁珠上，用于在鉸鏈下方自動(dòng)消化IgG。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORMagIC磁珠含有FabRICATOR固定化酶。這些微球能夠在中級(jí)表征工作流程中并行快速自動(dòng)酶解多種抗體。它們專為自動(dòng)化平臺(tái)而設(shè)計(jì)，但在無(wú)法實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的情況下，在振動(dòng)臺(tái)上的表現(xiàn)同樣出色。酶切消解后，樣品可直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)行快速色譜分析，或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進(jìn)行分析。自動(dòng)平行抗體酶切和亞基生成允許處理與克隆選擇、工藝開發(fā)和潛在生物制藥穩(wěn)定性研究相關(guān)的大量樣品。自動(dòng)抗體亞基分析可減少操作人員的時(shí)間和樣品處理錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)，并提高通量。有助于監(jiān)測(cè)多種CQA，例如糖基化、氧化和C端賴氨酸剪切。湖南GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

不同于IdeS，Genovis的FabDELLO 是一種蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人 IgG1，在兩小時(shí)內(nèi)產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段，無(wú)需還原條件。該酶對(duì)具有突變鉸鏈區(qū)域的抗體（如 LALA 突變）具有活性，并啟用中級(jí) LC-MS 來(lái)表征具有突變鉸鏈的抗體的關(guān)鍵質(zhì)量屬性。FabDELLO 在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人 IgG1 （...KSCDK / THTCPPCP...），生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單個(gè)消化位點(diǎn)是人 IgG1 的三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果，使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，則Fc上暴露的賴氨酸處可能會(huì)出現(xiàn)額外的消化位點(diǎn)。FabDELLO在天然條件下具有活性，需要鈣離子的存在。在37°C和pH 7-8.5下獲得良好活性。FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細(xì)菌克隆而來(lái)的，并在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 32 kDa。上海FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統(tǒng)酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細(xì)優(yōu)化，降低多個(gè)消化位點(diǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。

一些應(yīng)用（如結(jié)合研究）具有高度靈敏度，因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此，Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速輕松地生成均質(zhì) F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制備來(lái)自多種 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（對(duì)于兔 IgG，請(qǐng)咨詢），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進(jìn)行處理 。 為了生成和純化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗，并通過(guò) SDS-page 進(jìn)行分析。首先，在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘，然后進(jìn)行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F（ab'）2 片段，并通過(guò)降低 pH 值，然后立即調(diào)整回中性 pH 值，一步洗脫結(jié)合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過(guò)程大約需要 1 小時(shí)

如果您想分析單克隆抗體或單克隆抗體分子，現(xiàn)在有了Genovis的一些新產(chǎn)品（IgA酶，IgM酶），其他的模式和分子形式（IdeS高通量的產(chǎn)品形式）來(lái)測(cè)定和監(jiān)測(cè)許多不同的CQA，Genovis可以緩解使用不同分析方法時(shí)可能出現(xiàn)的瓶頸。 生產(chǎn)大量的樣品當(dāng)然很好，但如果分析團(tuán)隊(duì)不能足夠快地處理它們，那就沒(méi)有什么意義了。 高通量分析需要一致的、易于使用的方法，當(dāng)然這些方法要快速，而且可能易于自動(dòng)化。 這正是我們所能提供的，這使Genovis能夠支持更多不同功能的客戶。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊，因此在變性條件下，還可能出現(xiàn)其他消化位點(diǎn)。

為了讓所有實(shí)驗(yàn)室都能同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體，Genovis的FabRICATORMagIC的設(shè)計(jì)具有靈活性，適用于一系列自動(dòng)化平臺(tái)。我們?cè)赥hermoScientific?KingFisher?純化系統(tǒng)上優(yōu)化了FabRICATORMagIC的工作流程，但它可以轉(zhuǎn)移到其他自動(dòng)化平臺(tái)，如果沒(méi)有自動(dòng)化，在振動(dòng)臺(tái)上也能同樣出色地工作。消解后，將含有處理樣品的深孔板直接轉(zhuǎn)移到LC-MS的自動(dòng)進(jìn)樣器中進(jìn)行快速色譜分析，或轉(zhuǎn)移到其他分析方法進(jìn)行分析。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容，以極大限度地減少自動(dòng)化系統(tǒng)中可能發(fā)生的純粹壓力。使用KingFisher儀器處理樣品時(shí)，樣品制備非常簡(jiǎn)單。將樣品、樹脂和緩沖液移液到指定的孔或板中，然后將板放入儀器中。設(shè)計(jì)用于FabRICATORMagIC的BindIt?協(xié)議將控制每個(gè)步驟的孵育溫度和時(shí)間。FabRICATOR MagIC磁珠含有Ides固定化酶專為自動(dòng)化平臺(tái)（振動(dòng)臺(tái)）而設(shè)計(jì)。河北IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis的GingisREX在6M時(shí)耐受尿素，吐溫高達(dá)1%，但活性在0.1%時(shí)受到SDC的負(fù)面影響。湖南GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

與IdeS不同，Genovis的GingisKHAN（Kgp）是一種半胱氨酸蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)（KSCDK/THTCPPC）消化人IgG1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。GingisKHAN是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單一的消化位點(diǎn)是人IgG1三維結(jié)構(gòu)的結(jié)果，使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，則Fc上暴露的賴氨酸處可能會(huì)出現(xiàn)額外的消化位點(diǎn)。GingisKHAN需要溫和的還原條件才能具有活性，并且在37°C和pH8下獲得活性。還原劑（2mM半胱氨酸）與酶一起提供。GingisKHAN是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。該酶用于使用LC-MS表征基于抗體的生物zhiliao藥物，研究Fc聚糖分析、雙特異性抗體、親和力和親和力效應(yīng)，并鑒定翻譯后修飾。湖南GingisKHANIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)