與IdeS不同,Genovis的GlySERIAS是一種獨(dú)特的酶,可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子,例如Gly4Ser和GlyxSery(GS)以及聚甘氨酸(G)接頭。該酶能夠分離多功能融合蛋白的各個(gè)結(jié)構(gòu)域,以促進(jìn)表征并增加對(duì)這些分子的理解。融合蛋白的中級(jí)分析既可以降低整體樣品的復(fù)雜性,又可以對(duì)翻譯后修飾進(jìn)行結(jié)構(gòu)域特異性鑒定和監(jiān)測(cè)。為了改善連接子的去除,Genovis建議使用GlySERIASImmobilized。對(duì)于連接子表征,我們推薦GlySERIAS凍干。具有柔性接頭的獨(dú)特酶消化融合蛋白;中級(jí)方法可降低融合蛋白表征的復(fù)雜性;復(fù)雜融合蛋白的可靠且可重復(fù)的消化。Genovis的GlySERIAS酶切由甘氨酸或甘氨酸和絲氨酸殘基的重復(fù)序列組成的柔性連接子。該酶在天然反應(yīng)條件下具有活性,能夠?qū)?fù)雜的融合蛋白進(jìn)行中級(jí)表征。連接子區(qū)域同時(shí)在多個(gè)位點(diǎn)被消化,導(dǎo)致先前連接的組分分離?;钚园l(fā)生在pH7.6下,孵育時(shí)間可以根據(jù)所需的產(chǎn)物而變化。GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來(lái)的,在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有His標(biāo)簽,分子量為18kDa。IgA2 亞類以三種等位基因形式存在,A2m1、A2m2 和 A2m3。甘肅GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切
上海倍篤生物科技有限公司(簡(jiǎn)稱“倍篤生物”),由中國(guó)科學(xué)院及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界人士,于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個(gè)品牌的儀器、試劑及耗材(如Genovis的IdeS酶),遵守相關(guān)法規(guī)要求,如cGMP規(guī)范、ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證等,致力于為診斷領(lǐng)域如分子診斷及病原微生物檢測(cè)研發(fā)等,藥物研發(fā)領(lǐng)域如細(xì)胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細(xì)胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī)、高質(zhì)量物料及專業(yè)服務(wù),以期與客戶共同協(xié)作,加快研發(fā)及生產(chǎn)進(jìn)度,為客戶提供更多價(jià)值。安徽GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切例如氧化、糖基化等翻譯后修飾,可以用IdeS酶。
LC-MS中級(jí)分析是一種被大眾接受的分析方法,用于快速表征mAb和其他基于IgG的生物制藥。它有助于理解多種關(guān)鍵質(zhì)量屬性 (CQA),例如糖基化、氧化和 C 端賴氨酸剪切。這種關(guān)于翻譯后修飾(PTM)的詳細(xì)知識(shí)是生物制藥開(kāi)發(fā)和制造所必需的。Genovis的FabRICATOR HPLC酶色譜柱,可快速進(jìn)行單克隆抗體的柱上酶切,并產(chǎn)生一致的亞基。該色譜柱含有固定化的FabRICATOR(IdeS)酶,可在鉸鏈下方快速且特異性地消化IgG,產(chǎn)生F(ab')2和Fc片段,而不會(huì)出現(xiàn)任何過(guò)度消化的風(fēng)險(xiǎn)。為了減少樣品處理并為樣品制備提供自動(dòng)化解決方案,F(xiàn)abRICATOR被共價(jià)固定在樹(shù)脂上,并裝在適用于HPLC的PEEK色譜柱硬件中。使用FabRICATOR HPLC色譜柱,只需稍作修改,即可使用標(biāo)準(zhǔn)HPLC-MS裝置自動(dòng)生成抗體亞基。然后,F(xiàn)abRICATOR HPLC色譜柱上消解產(chǎn)生的亞基被捕獲在在線連接的反相(RP)色譜柱的柱頭上。
Genovis提供具有低水平內(nèi)Du素的FabRICATOR(IdeS)凍干酶,用于IgG的鉸鏈以下消化。FabRICATOR(IdeS)是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體,產(chǎn)生均質(zhì)的F(ab')2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以凍干粉的形式提供兩種不同規(guī)格:2000和5000單位,分別用于消化2mg或5mgIgG。該產(chǎn)品配方每瓶的內(nèi)Du素含量較低,2000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.04EU/瓶,5000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.10EU/瓶。有效消化,內(nèi)DU素水平低;適用于靈敏的體內(nèi)或基于細(xì)胞的檢測(cè)。幾乎完全消化了Fc結(jié)構(gòu)域中的連接子,留下了接近均質(zhì)的Fc/2產(chǎn)物。
Blinatumomab(一種對(duì) CD19 和 T 細(xì)胞標(biāo)志物 CD3 具有特異性的 BiTE 分子)的研究級(jí)生物仿制藥在室溫下用固定化過(guò)夜的 Genovis的GlySERIAS 消化。通過(guò)LC-MS對(duì)消解樣品的直接分析表明,所有三個(gè)連接子區(qū)域均被消解,α-CD3 VL和VH鏈洗脫為一個(gè)色譜峰,α-CD19 VH和VL鏈作為單獨(dú)的峰洗脫。來(lái)自連接的 α-CD3 VH 和 α-CD19 VH 結(jié)構(gòu)域的小峰顯示該短連接子未完全消化,表明 GlySERIAS 對(duì)短連接子的活性較低。與完整的蛋白質(zhì)分析相比,四個(gè)結(jié)構(gòu)域的分離提供了具有單同位素分辨率的高質(zhì)量光譜??梢杂^察到每個(gè)結(jié)構(gòu)域的幾個(gè)不同變體,剩余的連接子殘基數(shù)量不同。在色譜分離過(guò)程中,α-CD3 VH結(jié)構(gòu)域無(wú)法從α-CD19 VH結(jié)構(gòu)域完全基線分離,導(dǎo)致在相關(guān)質(zhì)譜中觀察到一些共洗脫。四個(gè)結(jié)構(gòu)域的分離產(chǎn)生了有關(guān)在完整蛋白質(zhì)水平上鑒定的蛋白質(zhì)修飾位置的信息。例如,在完整水平上鑒定的 37 Da 的蛋白質(zhì)修飾被分配給 α-CD3 VH 鏈。此外,240Da 和 320da 的兩個(gè)修飾分別被分配給 α-CD3 VL 結(jié)構(gòu)域。后者還含有一個(gè)帶有五六個(gè)組氨酸殘基的 His 標(biāo)簽。這些數(shù)據(jù)證明了使用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 對(duì)包含多個(gè)柔性連接子蛋白進(jìn)行質(zhì)量控制的中級(jí)工作流程的強(qiáng)大功能。FabRICATOR Magic自動(dòng)平行抗體酶切和亞基生成,用于處理與克隆選擇。山西GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學(xué)
有一種檢測(cè)FabRICATOR(IdeS蛋白酶)酶的方法。了解有關(guān)山羊多克隆抗體 Anti-FabRICATOR 的更多信息。甘肅GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切
與IdeS不同,Genovis的FabULOUS(SpeB)是一種半胱氨酸蛋白酶,可在來(lái)自多個(gè)不同物種和亞類的IgG的鉸鏈區(qū)域消化,產(chǎn)生Fab和Fc片段。人、小鼠、大鼠、山羊和綿羊的IgG被FabULOUS消化,產(chǎn)生Fab和Fc片段。人IgG1的主要消化位點(diǎn)是......KTHT...例如,制備的Fab片段可用于親和力研究、Fab糖基化研究和結(jié)構(gòu)研究。對(duì)來(lái)自多個(gè)物種和亞類的IgG有活性–上鉸鏈區(qū)域的消化物;快速-在一小時(shí)內(nèi)生成Fab和Fc片段;有效消化小鼠IgG1。FabULOUS來(lái)源于化膿性鏈球菌,在大腸桿菌中表達(dá)。FabULOUS的分子量為29kDa,該酶含有His標(biāo)簽。甘肅GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切