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肝纖維化HF動(dòng)物模型多少錢江蘇艾菱菲生物科供應(yīng)
目前國(guó)內(nèi)外在誘導(dǎo)肝纖維化模型形成的方法中，常用的肝纖維化動(dòng)物模型包括si氯化碳（CCL4）誘導(dǎo)模型、er甲基亞硝胺（NDMA）誘導(dǎo)模型、膽管結(jié)扎誘導(dǎo)肝纖維化模型、飲食誘導(dǎo)模型等。
但*經(jīng)典、*常用的方法是應(yīng)用CCl4誘導(dǎo)下建立肝纖維化動(dòng)物模型。
什么是CCL4?
CCl4 是一種無色透明的揮發(fā)性液體，通過甲烷和CI2經(jīng)熱氯化反應(yīng)而得。CCl4 具有強(qiáng)烈的肝毒性，可直接溶解肝細(xì)胞膜，經(jīng)肝細(xì)胞細(xì)胞色素 P450 依賴性混合功能氧化酶的代謝生成三氯化碳（-CCl3 ），啟動(dòng)脂質(zhì)過氧化作用，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷 。
CCl4作用于肝臟的過程中產(chǎn)生炎癥因子和自由基從而jh肝星狀細(xì)胞（HSC），HSC 為細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的主要來源，過多的ECM 沉積于肝內(nèi)導(dǎo)致肝纖維化。
CCL4誘發(fā)肝纖維動(dòng)物模型
一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇
由于雌性大鼠對(duì)CCl4易產(chǎn)生耐受而成模率低，所以CCl4復(fù)制肝纖維化模型通常以小鼠或雄性大鼠作為選用對(duì)象，染毒途徑主要為灌胃、腹腔注射或皮下注射。
二、大鼠造模方法
01 配制CCl4溶液，CCl4與橄欖油按照體積比1:4混勻，備用。
02 按大鼠體重0.5μl/g CCl4（2.5μlCCl4橄欖油溶液）腹腔注射，每周2次，持續(xù)6周。空白對(duì)照組只注射橄欖油2.5μl/g。
03 在連續(xù)給CCl42周后，可隨機(jī)抽取對(duì)照組和造模組鼠各3只，檢測(cè)ALT、AST、TBL以及切片等是否造模成功。
HE染色檢測(cè)肝纖維化模型
大鼠肝纖維化病理切片
注: A: 正常組: B: 肝纖維化模型組。
正常細(xì)肝組織內(nèi)肝細(xì)胞胞漿主富、紅染，無明顯脂肪變性等，肝細(xì)胞圍繞zy靜脈呈放射狀排列。
模型組肝細(xì)胞明顯脂肪變性，部分肝細(xì)胞水樣變性，小葉結(jié)構(gòu)不清，纖維組織明易增生，形成纖維間隔，分割肝小葉，纖維間隔內(nèi)有散在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
04 若模型成功，即可進(jìn)行藥物評(píng)價(jià)，繼續(xù)處理4周后，即可處死大鼠，檢測(cè)肝纖維化相關(guān)的Marker，評(píng)價(jià)藥物效果。
正常組肝臟表面呈鮮紅色，表面光滑柔軟，無結(jié)節(jié)和顆粒，肝緣銳利，形態(tài)與大小均正常。
肝纖維化模型組肝臟表明顏色較正常組織暗淡，質(zhì)地稍韌，表面有顆粒改變，肝緣較正常組變鈍，被膜腫脹。
模型特點(diǎn)：注射CCl4后，模型動(dòng)物活動(dòng)逐漸減少，精神萎靡，毛發(fā)蓬亂無光澤，進(jìn)食量減少，體重增長(zhǎng)速度減慢。
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三、小鼠造模方法
01 成年雄性小鼠，按 5 ml/kg 體重的劑量皮下注射20%CCL茶油溶液，每5天一次，連續(xù)3個(gè)月。對(duì)照組小鼠腹腔注射等量等次的橄欖油溶劑。
02 正常飲食飼養(yǎng)，觀察動(dòng)物活動(dòng)、精神狀況和飲食情況，每周稱重一次。
03 實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，禁食6小時(shí)，然后處死小鼠取肝臟用于病理及相關(guān)蛋白分析。
注意觀察：
1、模型小鼠在造模30d時(shí)，半數(shù)動(dòng)物肝臟出現(xiàn)少量，纖維組織增生；
2、60d時(shí)，多數(shù)動(dòng)物呈現(xiàn)少量至中等纖維組織增生;
3、90d時(shí)，全部動(dòng)物呈中等至大量纖維組織增生，肝臟釋脯氨酸含量亦隨造模時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸升高；造模60d 時(shí)升高，至90d時(shí)升高更xz。
4、肝臟丙二醛含量和血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶在造模各階段均明顯升高，至造模 90d時(shí)，血漿白蛋白比例明顯下降。
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