MSCs是異質(zhì)性的細(xì)胞群,其組成可能受培養(yǎng)條件的影響。血小板裂解液中肝素及其濃度高低對(duì)細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)模式并未有明顯的影響。通過免疫熒光顯微鏡分析未發(fā)現(xiàn)波形蛋白(一種通常在中胚層起源的細(xì)胞中表達(dá)的中間絲)和α-SMA表達(dá)的差異,肝素濃度對(duì)于α-SMA(綠色)和波形蛋白(紅色)的分布并無影響。脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞(AT-MSC)和骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSC)本身免疫表型就是相似的,經(jīng)添加不同濃度肝素的血小板裂解液培養(yǎng)擴(kuò)增的AT-MSC和BM-MSC的流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示出CD29、CD73、CD90和CD105表達(dá),而表面標(biāo)記CD14、CD31、CD34和CD45的缺失,可見肝素濃度對(duì)MSC免疫表型的表達(dá)水平幾乎是沒有影響的。血小板裂解液哪個(gè)牌子好?Mill Creek血小板裂解液品牌比較
間充質(zhì)間質(zhì)細(xì)胞(MSCs)體外擴(kuò)增的培養(yǎng)基一般添加胎牛血清FBS,但是考慮到異種ganran及免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn),監(jiān)管機(jī)構(gòu)并不鼓勵(lì)使用。人血小板裂解液除了不存在異種免疫反應(yīng)或牛病原體ganran的風(fēng)險(xiǎn),有助于增強(qiáng)間充質(zhì)干細(xì)胞的擴(kuò)增,也相對(duì)容易地根據(jù)良好的生產(chǎn)規(guī)范程序生產(chǎn),并已用于臨床應(yīng)用,因此現(xiàn)如很多資料顯示血小板裂解液已被證明是擴(kuò)增MSCs一種非常有效的FBS替代方法(參考文獻(xiàn)1)。 血小板裂解液由血漿組成,含有纖維蛋白原和凝血因子,對(duì)于一般細(xì)胞培養(yǎng)中涉及的含鈣培養(yǎng)基來說通常需要加入抗凝劑(常用肝素、Rivaroxaban利伐沙班、argatroban阿加曲班等)來防止凝膠形成,其中肝素很為常用。血小板裂解液的解凍方法血小板裂解液里面的沉淀對(duì)細(xì)胞有影響嗎?
使用胎牛血清(FBS)和MSC的離體擴(kuò)增其他動(dòng)物衍生的已氣餒由監(jiān)管機(jī)構(gòu),以減少發(fā)送朊病毒和其他動(dòng)物傳染病的危險(xiǎn),并且避免在所述異種免疫反應(yīng)主辦。然而,由于缺乏FBS制劑標(biāo)準(zhǔn)化導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)性能 不一致性和FBS生產(chǎn)已經(jīng)到來,因?yàn)閯?dòng)物福利問題很初提出血小板裂解液(PL)作為動(dòng)物血清的替代物,用于由Doucet等人體外擴(kuò)增MSC。 包含在PL的生物活性分子和生長(zhǎng)因子支持的MSC從骨髓(BM) 導(dǎo)出的膨脹,臍帶血(UCB) ,和脂肪組織(AT) ,與FBS相比顯示出有利的結(jié)果。此外,間充質(zhì)干擴(kuò)大了與PL-富集介質(zhì)已被用于zhiliao患有jisu難治性急性移植物抗宿主病(GVHD)造血干細(xì)胞移植后患者和患有幾種骨科疾病的患者,主要是中度至重度的膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎 。
前述所說的生長(zhǎng)因子大多存在于血小板內(nèi)部的α顆粒中,當(dāng)血小板被活化后會(huì)產(chǎn)生脫顆粒作用(即血小板的α顆粒會(huì)和細(xì)胞膜融合),進(jìn)而釋放大量活化的生長(zhǎng)因子。而人源血小板裂解物就是直接將人類來源血小板細(xì)胞經(jīng)過連續(xù)的反復(fù)凍融裂解后,進(jìn)一步提純這些血小板脫顆粒的商品;人源血小板裂解物除了擁有比富血小板血漿更高的生長(zhǎng)因子濃度,更用特殊工藝去除了細(xì)胞碎片,大幅降低了使用過程中的免疫原性。
人源血小板裂解物的使用方式非常方便簡(jiǎn)單,在培養(yǎng)基中添加5%血小板裂解物,混合均勻后即可直接用來培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞,且在傳代過程中不需要預(yù)包被培養(yǎng)皿。適合應(yīng)用在多種來源的間充質(zhì)原代干細(xì)胞培養(yǎng)過程呦! 如何選擇血小板裂解液?
血小板裂解液解凍后請(qǐng)立即進(jìn)行培養(yǎng)基的配制,配置好的培養(yǎng)基在2-8°C環(huán)境下保存并盡快使用,不建議超過21天。如解凍后的原瓶無法全部使用,建議按需分裝成合適的小瓶中進(jìn)行-20°C保存一旦產(chǎn)品瓶或袋經(jīng)過初始解凍過程,建議盡快將產(chǎn)品置于基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。盡管對(duì)于儲(chǔ)存在2-8°C的準(zhǔn)備好的含有hPL的培養(yǎng)基,Sexton的內(nèi)部測(cè)試有效期為21天,但建議客戶進(jìn)行內(nèi)部驗(yàn)證研究,以確定其基于血小板裂解液的完整培養(yǎng)基的有效期。使用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑等變量可能會(huì)縮短或延長(zhǎng)完整培養(yǎng)基產(chǎn)品的有效期。血小板裂解液怎么樣使用?人血小板裂解液斷貨
血小板裂解液通常用什么方法滅菌?Mill Creek血小板裂解液品牌比較
ELAREM Prime血小板裂解液在標(biāo)簽上的有效期內(nèi)都是穩(wěn)定的。ELAREM Prime在使用前儲(chǔ)存在-20°C或更低溫度調(diào)節(jié)下時(shí)穩(wěn)定性比較好的。解凍后,建議分裝并重新冷凍未使用的ELAREM Prime在-20°C下。應(yīng)避免反復(fù)凍融。無菌ELAREM Prime為無菌加工工藝,微生物培養(yǎng)為陰性。質(zhì)量控制測(cè)試由經(jīng)過認(rèn)證的第三方測(cè)試實(shí)驗(yàn)室完成??勺匪菪院皖A(yù)防措施ELAREM Prime是從經(jīng)過EMA授權(quán)的**中心的健康捐獻(xiàn)者來源的血小板單位生產(chǎn)而來的。獻(xiàn)血者均通過歐盟現(xiàn)行的獻(xiàn)血者資格準(zhǔn)則的資格審核。Mill Creek血小板裂解液品牌比較
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