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AAV包裝PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝適合新手快速上手

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-01-23

Transporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種即用型線性聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染試劑(PEI)衍生物。由PEIMAX配置而成的即用型無菌試劑,采用0.1μmPES無菌過濾器,完全消除支原體污染風(fēng)險(xiǎn)。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgene用于cGMP生產(chǎn)。MAXgeneGMP(cat#26406/26435)是一種cGMP級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑,在Polysciences研究等級(jí)聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染試劑(PEIMAX或Transporter5)的效率和可擴(kuò)展性基礎(chǔ)上增加了驗(yàn)證工藝和監(jiān)管流流程,適用于細(xì)胞和基因Zhi Liao病毒載體的研發(fā)和生產(chǎn)。如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!線性的和分支的PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個(gè)好?AAV包裝PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝適合新手快速上手

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PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑-高度濃縮,可制備大量轉(zhuǎn)染試劑Polysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子,每相隔二個(gè)碳原子,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,大量科學(xué)家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑。多年以來,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評(píng)審的公開研究和出版文獻(xiàn)表明,在HEK293、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強(qiáng)。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高基因表達(dá)細(xì)胞體系,實(shí)現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。而且與大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案相比,使用PEIMAX至少可降低40%轉(zhuǎn)染成本(部分案例可降低90%轉(zhuǎn)染成本)。如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!江蘇可直接使用PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝PEI轉(zhuǎn)染試劑如何做殘留檢測(cè)?

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穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

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準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!?PEI轉(zhuǎn)染試劑的殘留檢測(cè)方法怎么開發(fā)呢?慢病毒(LV)包裝PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝free申請(qǐng)

美國Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣?AAV包裝PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝適合新手快速上手

PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn)。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,選擇PEI,以至于相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi),轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn):1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時(shí),一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,順序不可錯(cuò),輕微混勻,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時(shí),一定要換液!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因?yàn)镻EI對(duì)細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當(dāng)提高。PS:事實(shí)證明,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!如想申請(qǐng)PEI試用裝,請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)”,即可參加!AAV包裝PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝適合新手快速上手

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