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快速慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-01-14

慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)??商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的慢病毒顆粒,需要利用表達(dá)載體和包裝載體同時(shí)共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞或其衍生細(xì)胞,在細(xì)胞中進(jìn)行病毒的包裝,包裝好的慢病毒顆粒分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,離心取得上清液后,通過(guò)純化濃縮進(jìn)一步提供慢病毒滴度,即可以直接用于宿主細(xì)胞的gan ran。目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞之后,經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄,整合到基因組,從而高水平的表達(dá)效應(yīng)分子。加入轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。快速慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

快速慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案,慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)

LentiBOOST是德國(guó)Sirion Biotech開(kāi)發(fā)的一種高效、無(wú)細(xì)胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)。它是一種非離子型、非受體依賴(lài)性的表面活性劑,通過(guò)降低細(xì)胞膜粘稠度、提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),促進(jìn)慢病毒與細(xì)胞膜的融合,提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。在異種移植后免疫缺陷小鼠體內(nèi),LentiBOOST使再植HSCs的VCN增加2倍,且對(duì)細(xì)胞分化和植入無(wú)影響。LentiBOOST在對(duì)人T細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒作用的情況下可增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生更多的Zhong Liu抗原特異性TCR-T細(xì)胞,且轉(zhuǎn)導(dǎo)后的 T細(xì)胞仍能分泌TNF及IFN-γ,并對(duì)抗原陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞具有明顯的細(xì)胞毒作用,這一發(fā)現(xiàn)為ai zheng的基因zhi liao提供新的優(yōu)化策略。提高慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。

快速慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案,慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)

SIRION Biotech成立于2005年,旨在領(lǐng)導(dǎo)下一代病毒載體技術(shù),用于基因和細(xì)胞zhi liao以及疫苗開(kāi)發(fā)。現(xiàn)在,SIRION提供了一個(gè)基于慢病毒、腺病毒和類(lèi)腺病毒的quan mian的病毒載體技術(shù)平臺(tái),加速了基因zhi liao研究和藥物開(kāi)發(fā)。SIRION正成為這一增長(zhǎng)領(lǐng)域的優(yōu)先合作伙伴。從早期臨床階段I/II到晚期臨床階段III的臨床試驗(yàn)中使用了LentBoost并證明了在改善zhi liao載體的轉(zhuǎn)導(dǎo)方面的臨床成功。德國(guó) Sirion Biotech 公司研發(fā)了 LentiBOOST 慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,專(zhuān)為提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)難轉(zhuǎn)的哺乳動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物細(xì)胞的效率。LentiBOOST 是一種無(wú)細(xì)胞毒性的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,用于臨床前和臨床應(yīng)用。作為一種普遍作用的(受體非依賴(lài)型)佐劑,可應(yīng)用于多種臨床相關(guān)細(xì)胞類(lèi)型,CD34+造血干細(xì)胞(HSCs)、原代 T 細(xì)胞和 NK 細(xì)胞等,對(duì)難轉(zhuǎn)導(dǎo)的小鼠 T 細(xì)胞亦有效。LentiBOOST 已成為改進(jìn)體外 (ex vivo) 基因zhi liao和 CAR-T 細(xì)胞zhi liao的臨床轉(zhuǎn)導(dǎo)方案的選擇。

人間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可誘導(dǎo)長(zhǎng)期轉(zhuǎn)基因表達(dá),并為多種基因zhi liao應(yīng)用帶來(lái)巨大希望。Polybrene是實(shí)驗(yàn)室研究中Zui常用的提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的試劑,但它未被批準(zhǔn)用于人體,并且還被證明會(huì)損害MSCs細(xì)胞的增殖和分化。因此,優(yōu)化轉(zhuǎn)導(dǎo)方案以應(yīng)用于臨床試驗(yàn)是非常有必要的。LentiBOOST和硫酸魚(yú)精蛋白是可替代的轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,可以按照現(xiàn)行的GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn),且很容易應(yīng)用于現(xiàn)有的轉(zhuǎn)導(dǎo)方案,并且曾被用于人類(lèi)CD34+HSCs細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。這里,我們研究了這些試劑用于脂肪來(lái)源MSC細(xì)胞的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增qiang xiao果。我們發(fā)現(xiàn)LentiBOOST和硫酸魚(yú)精蛋白的組合使用可以產(chǎn)生與polybrene相當(dāng)甚至更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且對(duì)細(xì)胞活力或干細(xì)胞特性沒(méi)有劑量依賴(lài)性的不良影響。這種轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑的組合dai biao了一種有價(jià)值的臨床兼容性polybrene替代方案,具有顯著提高基因zhi liao應(yīng)用中MSCs慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的潛力??梢杂檬裁醋雎《巨D(zhuǎn)導(dǎo)?

快速慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案,慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)

目前,CAR-T細(xì)胞主要通過(guò)病毒載體制備,大多數(shù)情況下由慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒做載體。慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進(jìn)靶細(xì)胞基因組,穩(wěn)定的基因表達(dá)等特點(diǎn),被認(rèn)為是Zui有希望的基因zhi liao載體。與其他病毒載體相比,慢病毒載體的整合模式具有更低的致Ai風(fēng)險(xiǎn),以及隨機(jī)整合基因風(fēng)險(xiǎn)低,因此,用慢病毒載體生產(chǎn)CAR-T細(xì)胞更加安全有效,而且靈活。更重要的是慢病毒相較于其他病毒載體,生產(chǎn)成本相對(duì)較低。另外,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細(xì)胞,也可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細(xì)胞,因此,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)更為guang fan的細(xì)胞,包括那些難轉(zhuǎn)導(dǎo)的血液前體細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)有臨床案例嗎?NK細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑

新合成的逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA整合到宿主DNA中,稱(chēng)為原病毒??焖俾《巨D(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

近幾年LentiBOOST作為一種無(wú)毒性的化學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑guang fan引起關(guān)注。LentiBOOST通過(guò)與細(xì)胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。研究證實(shí)LentiBOOST在不影響轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞存活、增殖及分化能力的前提下,提高小鼠T細(xì)胞、HSCs和人HSCs的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。在異種移植后免疫缺陷小鼠體內(nèi),LentiBOOST使再植HSCs的VCN增加2倍,且對(duì)細(xì)胞分化和植入無(wú)影響。LentiBOOST在對(duì)人T細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒作用的情況下可增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生更多的Zhong Liu抗原特異性TCR-T細(xì)胞,且轉(zhuǎn)導(dǎo)后的 T細(xì)胞仍能分泌TNF及IFN-γ,并對(duì)抗原陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞具有明顯的細(xì)胞毒作用,這一發(fā)現(xiàn)為ai zheng的基因zhi liao提供新的優(yōu)化策略??焖俾《巨D(zhuǎn)導(dǎo)優(yōu)化方案

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司在血小板裂解液,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍(lán)牙無(wú)線(xiàn)標(biāo)簽機(jī)一直在同行業(yè)中處于較強(qiáng)地位,無(wú)論是產(chǎn)品還是服務(wù),其高水平的能力始終貫穿于其中。曼博生物是我國(guó)醫(yī)藥健康技術(shù)的研究和標(biāo)準(zhǔn)制定的重要參與者和貢獻(xiàn)者。曼博生物致力于構(gòu)建醫(yī)藥健康自主創(chuàng)新的競(jìng)爭(zhēng)力,將憑借高精尖的系列產(chǎn)品與解決方案,加速推進(jìn)全國(guó)醫(yī)藥健康產(chǎn)品競(jìng)爭(zhēng)力的發(fā)展。

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