PEI在于可以應用于體內(nèi)試驗。當初試驗經(jīng)費很有限，被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000，選擇PEI，以至于相當長的時間內(nèi)，轉(zhuǎn)染試驗都不順利。下面是幾點關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點：1. PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2. 轉(zhuǎn)染時，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中，順序不可錯，輕微混勻，靜止20 min3. 轉(zhuǎn)染后4小時，一定要換液！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因為PEI對細胞毒性太大4. 如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選，建議把血清濃度適當提高。PEI轉(zhuǎn)染試劑是線性的好還是分支的好？cGMP級PEI轉(zhuǎn)染試劑授權(quán)代理商

瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前，用膠原酶消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，總體積如表1所示，每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管。即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種高分子化學類轉(zhuǎn)染試劑。

特別提醒1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。

瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。PEI轉(zhuǎn)染試劑可以轉(zhuǎn)染哪些細胞？

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為什么PEI轉(zhuǎn)染試劑配制的過程中要加酸？cGMP級PEI轉(zhuǎn)染試劑授權(quán)代理商

線性化聚乙烯亞胺pei25,000,一種高電荷陽離子聚合物,非常容易結(jié)合于高電荷陰離子基質(zhì)。工業(yè)應用上線性化pei可改善負電荷染料的物理外觀以調(diào)整染料的化學特性和增強染料與固相基質(zhì)的黏附能力,常用作黏附增強劑,作用同多聚賴氨酸(poly-lysine);科研應用上;線性化pei能與dna或其他負電荷生物大分子簡單結(jié)合,正是這一特性,使得成為一種非常行之有效的載體運輸介質(zhì)(vector carrier),即轉(zhuǎn)染試劑。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年，依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內(nèi)客戶群體，生命科學領(lǐng)域一站式供應鏈體系，以及高風險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢.cGMP級PEI轉(zhuǎn)染試劑授權(quán)代理商

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