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NLS-Cas9-NLS Nuclease

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-08-07

轉(zhuǎn)座酶是一類(lèi)能夠催化轉(zhuǎn)座子(一種可移動(dòng)的DNA序列)在基因組中從一個(gè)位置移動(dòng)到另一個(gè)位置的酶。轉(zhuǎn)座子可以在DNA分子上“跳躍”,在新的位置上插入自己的拷貝,而原始位置的轉(zhuǎn)座子則可能被切除或保留。轉(zhuǎn)座酶的作用是轉(zhuǎn)座過(guò)程中的關(guān)鍵因素,它們可以被分為兩類(lèi):1.**復(fù)制型轉(zhuǎn)座酶**:在復(fù)制型轉(zhuǎn)座過(guò)程中,轉(zhuǎn)座子首先被復(fù)制,然后復(fù)制的拷貝到新的基因組位置,原始的轉(zhuǎn)座子留在原位。這種機(jī)制通常涉及到“復(fù)制-粘貼”的過(guò)程。2.**剪切型轉(zhuǎn)座酶**:在剪切型轉(zhuǎn)座過(guò)程中,轉(zhuǎn)座子從原始位置被切除,然后到新的基因組位置。這涉及到“剪切-粘貼”的過(guò)程。轉(zhuǎn)座酶的活性和轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)可以對(duì)基因組的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要影響,包括:-**基因突變**:轉(zhuǎn)座子的插入可能破壞基因的正常功能,導(dǎo)致突變。-**基因組多樣性**:轉(zhuǎn)座活動(dòng)增加了基因組的多樣性,有助于物種適應(yīng)環(huán)境變化。-**基因調(diào)控**:轉(zhuǎn)座子的插入可能激起或抑制某些基因的表達(dá)。-**新基因產(chǎn)生**:在某些情況下,轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)可以導(dǎo)致新基因的產(chǎn)生。

在基因編輯中,Pfu DNA Polymerase可以用于精確地引入特定位點(diǎn)的突變,或在基因組中插入特定的DNA序列。NLS-Cas9-NLS Nuclease

NLS-Cas9-NLS Nuclease,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

T4UvsX重組酶的保存和純化是實(shí)驗(yàn)室工作流程中的重要環(huán)節(jié),確保了酶的穩(wěn)定性和活性。以下是根據(jù)搜索結(jié)果提供的信息:保存條件:-T4UvsX重組酶通常在-20°C的條件下保存,可以保持3年的有效期。-某些產(chǎn)品說(shuō)明中提到,該制品不含甘油,可用于建立凍干體系,這可能對(duì)長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸有額外的好處。-建議避免反復(fù)凍融,因?yàn)檫@可能會(huì)影響酶的活性。純化過(guò)程:-T4UvsX重組酶是由大腸桿菌表達(dá)和純化的。這意味著科學(xué)家首先將T4噬菌體的uvsX基因克隆到適合在大腸桿菌中表達(dá)的質(zhì)粒載體中。-然后將這個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌宿主細(xì)胞中,使其表達(dá)T4UvsX蛋白。-接下來(lái),通過(guò)一系列生化步驟從大腸桿菌細(xì)胞中提取和純化T4UvsX蛋白,這些步驟可能包括細(xì)胞裂解、離心、層析等技術(shù)。注意事項(xiàng):-T4UvsX重組酶的保存液中甘油含量為20%,建議單獨(dú)分裝保存,以避免反復(fù)凍融。-該酶無(wú)核酸酶活性,這表明它在催化反應(yīng)時(shí)不會(huì)切割DNA鏈,而是促進(jìn)DNA鏈的重組。-本產(chǎn)品供科研用途,不應(yīng)用于臨床診斷。應(yīng)用:-T4UvsX重組酶主要用于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù),如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA),這是一種快速、靈敏的核酸檢測(cè)技術(shù)。通過(guò)遵循這些保存和純化指南,研究人員可以確保T4UvsX重組酶在實(shí)驗(yàn)中的有效性和可靠性。Recombinant Human CD45/PTPRC (His Tag)Cas9 NLS可用于體外實(shí)驗(yàn)中篩選能夠高效引導(dǎo)Cas9蛋白進(jìn)行DNA剪切的gRNA序列 。

NLS-Cas9-NLS Nuclease,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

Benzonase核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)高靈敏性:1.**熒光探針技術(shù)**:試劑盒采用熒光標(biāo)記的DNA探針,這種探針在沒(méi)有Benzonase核酸酶的樣品中穩(wěn)定存在且不產(chǎn)生熒光信號(hào)。當(dāng)樣品中含有核酸酶殘留時(shí),核酸酶會(huì)切割熒光標(biāo)記的DNA探針,導(dǎo)致熒光信號(hào)的增強(qiáng)。這種變化可以用來(lái)定量分析Benzonase的殘留量,實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測(cè)。2.**熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)**:該技術(shù)利用了供體(Donor)和受體(Acceptor)熒光基團(tuán)間的相互作用。在未切割狀態(tài)下,供體的熒光被受體淬滅,而一旦DNA探針被Benzonase切割,供體熒光基團(tuán)與受體分離,熒光信號(hào)增強(qiáng),從而實(shí)現(xiàn)高靈敏度的檢測(cè)。3.**優(yōu)化的底物探針**:試劑盒中的Benzonase底物是一種合成的DNA寡核苷酸探針,其一端具有VIC熒光基團(tuán),另一端具有BHQ1淬滅基團(tuán)。這種設(shè)計(jì)使得在底物被切割后,VIC熒光不再被BHQ1淬滅,從而可以非常靈敏地檢測(cè)到Benzonase核酸酶活性。4.**高靈敏度的檢測(cè)范圍**:試劑盒能夠檢測(cè)到低達(dá)約0.002U(約0.003ng)的Benzonase或BeyoZonase,樣品中的Benzonase濃度約為0.0002U/μl或0.3pg/μl,這遠(yuǎn)低于常規(guī)同類(lèi)產(chǎn)品的檢測(cè)限。

5'DNA腺苷?;噭┖型ㄟ^(guò)特定的酶催化反應(yīng),將5'-磷酸化的單鏈DNA(pDNA)轉(zhuǎn)化為5'-腺苷酰化DNA(AppDNA)。以下是啟用5'-磷酸化的單鏈DNA的一般步驟:1.**準(zhǔn)備反應(yīng)體系**:-根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū),準(zhǔn)備所需的反應(yīng)組分,包括5'-磷酸化的單鏈DNA、腺苷?;福ㄈ鏏denylase或MthRNA連接酶)、ATP和相應(yīng)的緩沖液。2.**混合組分**:-將5'-磷酸化的單鏈DNA與腺苷?;浮TP和緩沖液混合在適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)容器中。3.**孵育反應(yīng)**:-將混合好的反應(yīng)體系在指定的溫度(通常是65℃)下孵育一定的時(shí)間,以允許酶將ATP中的AMP部分轉(zhuǎn)移到DNA的5'端。4.**酶失活**:-反應(yīng)完成后,在85℃孵育5分鐘以失活腺苷?;福@一步是為了防止后續(xù)的去腺苷?;F(xiàn)象,確保腺苷酰化比率不下降。5.**產(chǎn)物收集**:-由于轉(zhuǎn)化效率高,通常不需要進(jìn)行凝膠純化步驟??梢酝ㄟ^(guò)乙醇沉淀等方法收集腺苷?;蟮腄NA產(chǎn)物。6.**產(chǎn)物應(yīng)用**:-收集的腺苷?;疍NA可以直接用于后續(xù)的克隆、測(cè)序、連接或其他分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。7.**注意事項(xiàng)**:-確保所有操作在無(wú)RNA酶和無(wú)DNA酶的環(huán)境中進(jìn)行,以避免污染。-使用時(shí)需注意反應(yīng)體系的準(zhǔn)確性,確保底物、酶和ATP的比例適當(dāng)。

利用His標(biāo)簽通過(guò)親和層析從細(xì)胞裂解物中純化目標(biāo)蛋白,然后可能通過(guò)離子交換層析、等方法進(jìn)一步提純。

NLS-Cas9-NLS Nuclease,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

5'DNA腺苷?;噭┖械倪m用性非常廣,主要包括以下幾個(gè)方面:1.**miRNA克隆**:該試劑盒可用于miRNA等3'端為羥基的RNA或單鏈DNA在克隆時(shí),3'端添加接頭的制備。2.**高通量測(cè)序建庫(kù)**:在高通量測(cè)序中,該試劑盒可用于制備5'端腺苷酰化修飾的單鏈DNA,這些DNA可以用于測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建。3.**PCR檢測(cè)**:在PCR檢測(cè)中,該試劑盒可以幫助制備具有特定5'端修飾的DNA片段,以適應(yīng)某些PCR應(yīng)用的需求。4.**單鏈DNA或RNA的5'端腺苷?;?*:試劑盒可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA或單鏈RNA轉(zhuǎn)換成5'端腺苷?;疍NA或RNA,無(wú)論3'端是否進(jìn)行了氨基化等封閉。5.**環(huán)狀DNA生成**:在不存在ATP的條件下,5'DNA/RNAAdenylase可以催化5'端磷酸化的單鏈DNA生成環(huán)狀DNA。6.**RNALigation**:該試劑盒包含的MthRNA連接酶,可以用于RNA的連接反應(yīng),尤其是在需要5'端腺苷?;疍NA作為連接接頭時(shí)。7.**科研實(shí)驗(yàn)**:所有提到的產(chǎn)品信息都明確指出,5'DNA腺苷?;噭┖杏糜诳蒲袑?shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途。在基因編輯中,Pfu DNA Polymerase 可用于目的基因或編輯工具的克隆,減少克隆過(guò)程中的非目標(biāo)突變。Recombinant Mouse Bcl-xL

將MAGE-A3基因序列克隆到一個(gè)表達(dá)載體中,該載體通常包含有抗生物質(zhì)抗性基因、啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)。NLS-Cas9-NLS Nuclease

磁珠法DNA凝膠回收試劑盒是一種用于從DNA瓊脂糖凝膠中快速、高效地回收DNA片段的實(shí)驗(yàn)工具。它通常包含特異性吸附核酸分子的納米磁珠和相應(yīng)的緩沖液系統(tǒng),能夠去除雜質(zhì),得到高質(zhì)量的DNA回收產(chǎn)物。這種試劑盒適用于從TAE和TBE瓊脂糖凝膠中回收大小在100bp到30kb之間的DNA片段,回收效率通??蛇_(dá)70%左右。使用磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的主要優(yōu)勢(shì)包括:1.操作簡(jiǎn)便快速,整個(gè)回收過(guò)程大約只需30分鐘。2.無(wú)需離心,方便實(shí)現(xiàn)高通量和自動(dòng)化的DNA回收。3.與柱式法相比,磁珠法對(duì)于長(zhǎng)片段DNA的回收效率更高,可高出約20%。4.純化得到的DNA可以直接用于酶切、連接、測(cè)序等后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。磁珠法的操作過(guò)程通常包括以下步驟:1.將瓊脂糖凝膠在融膠液中迅速融解,使DNA充分釋放。2.DNA與磁珠特異性結(jié)合,通過(guò)磁分離快速高效地分離磁珠與溶液。3.經(jīng)過(guò)洗滌去除雜質(zhì)。4.使用洗脫液將DNA從磁珠上洗脫,獲得高純度的DNA樣品。此外,一些試劑盒的說(shuō)明書(shū)還會(huì)提供具體的操作步驟和所需材料的清單,包括磁珠、融膠液、洗滌液、洗脫液等組分,以及可能需要自備的無(wú)水乙醇和磁分離裝置。在使用過(guò)程中,需要注意產(chǎn)品的保存條件和有效期,以及操作時(shí)的個(gè)人安全防護(hù)措施。NLS-Cas9-NLS Nuclease

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