培養(yǎng)基化學(xué)分類編輯語(yǔ)音培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指一類利用動(dòng)物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低，除在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用外，也適于用來(lái)進(jìn)行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基組合培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分，用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)而配制的培養(yǎng)基。例如，高氏1號(hào)培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方，配制合成培養(yǎng)基時(shí)重復(fù)性強(qiáng)，但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高，微生物在其中生長(zhǎng)速度較慢，一般適于在實(shí)驗(yàn)室用來(lái)進(jìn)行有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測(cè)定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。[2]培養(yǎng)基半組合培養(yǎng)基指一類主要以化學(xué)試劑配制，同時(shí)還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如，馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。培養(yǎng)基物理分類編輯語(yǔ)音培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基80%～90%是水，其中配有可溶性的或不溶性的營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的***物。金山區(qū)提供臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基售后服務(wù)

    蒸餾水）919mlSE培養(yǎng)基·6H2OFe—EDTA1mlA5solution1000×1mldistilledwater958mlSoilExtract（土壤提取液）配置方法取花園土未施過(guò)肥，加入蒸餾水1000毫升，瓶口用透氣塞封口，在水浴中沸水加熱2小時(shí)，冷卻數(shù)小時(shí)，在無(wú)菌條件下過(guò)濾，取上清液，將滅菌蒸餾水加入上清液至總體積1000毫升。土壤提取液保存在4℃?zhèn)溆?。CompositionoftheA5solutionAddto100mlofdistilledwater:（加入100ml的蒸餾水）（NH4）：將EDTA和FeCl3·6H2O分別溶于水和HCl（），混勻即可。Na2EDTA1gdistilledwater50mlFeCl3·6H2O81mgHCl（）50mlPr培養(yǎng)基Preparation:to997mLofglass-distilledwater,addgproteosepeptone,gagar,andthefollowingstocksolutions:workingsolutiong/()1mlA5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。***培養(yǎng)基薩市（Sabouraud’s）培養(yǎng)基蛋白胨10g，瓊脂20g，麥芽糖40g，水1000ml先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，加入40g麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然后分裝，滅菌，備用。本培養(yǎng)菌是培養(yǎng)許多種類***所常用的。馬鈴薯糖瓊脂培養(yǎng)基把馬鈴薯洗凈去皮，取200g切成小塊，加水1000ml，煮沸半小時(shí)后，補(bǔ)足水分。在濾液中加入10g瓊脂，煮沸溶解后加糖20g。虹口區(qū)生態(tài)臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量保證無(wú)細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國(guó)家要求無(wú)細(xì)菌噬菌體污染。

    二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至，若pH值超過(guò)，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體，置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無(wú)血清培養(yǎng)基。四、***素為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染，可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)***素，一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/毫升，鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素（PHA）非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細(xì)胞，但在離體培養(yǎng)過(guò)程中，在PHA的作用下，可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂。經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時(shí)和68-72小時(shí)。PHA有粘多糖，蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA***的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細(xì)胞均被***為止，但PHA濃度過(guò)高會(huì)引起凝集，一般采用4%濃度為好。

    血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x***中起重要作用，如SeO3、硒等。血清培養(yǎng)基主要問(wèn)題1．血清的成份可能有幾百種之多，對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制不清楚，尤其是對(duì)其中一些多肽類生長(zhǎng)因子、***和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí)，這給研究工作帶來(lái)許多困難。2．血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保證每批血清的相似性極為困難，從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。3．對(duì)大多數(shù)細(xì)胞，在體內(nèi)狀態(tài)，血清不是它們接觸的生理學(xué)液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過(guò)程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)（成纖維細(xì)胞）同時(shí)***另一類細(xì)胞生長(zhǎng)（表皮細(xì)胞）。4．血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)（如精胺、亞精胺）形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌***等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞死亡。5．動(dòng)物個(gè)體不同，血清產(chǎn)地、批號(hào)不同，每批質(zhì)量差異甚大，其成分不能保持一致。6．取材中可能帶入支原體、病毒，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響，可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn)結(jié)果不可靠性。7．大規(guī)模生產(chǎn)中，血清來(lái)源越來(lái)越困難。WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求。

    對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用，℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過(guò)程中，長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞，如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養(yǎng)基常在，℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌，某些對(duì)糖類要求較高的培養(yǎng)基，可先將糖進(jìn)行過(guò)濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合；長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽(yáng)離子（特別是鈣、鎂、鐵離子）結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀，因此，在配制用于觀察和定量測(cè)定微生物生長(zhǎng)狀況的合成培養(yǎng)基時(shí)，常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑，避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸（EDTA）。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進(jìn)行滅菌，然后再混合，避免形成沉淀；高壓蒸汽滅菌后，培養(yǎng)基pH會(huì)發(fā)生改變（一般使pH降低），可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求，在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。在配制培養(yǎng)基過(guò)程中，泡沫的存在對(duì)滅菌處理極不利，因?yàn)榕菽械目諝庑纬筛魺釋樱古菽形⑸镫y以被殺死。因而有時(shí)需要在培養(yǎng)基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產(chǎn)生，或適當(dāng)提高滅菌溫度。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。虹口區(qū)生態(tài)臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基質(zhì)量保證

用于取材的動(dòng)物應(yīng)健康無(wú)病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi)。金山區(qū)提供臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基售后服務(wù)

    應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養(yǎng)基，應(yīng)先用一部分水將瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過(guò)程中，因蒸發(fā)而丟失的水分，**后必須加以補(bǔ)足。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)整培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正，因培養(yǎng)基在加熱消毒過(guò)程中、pH會(huì)有所變化，例如，牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會(huì)有***的升高。因此，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的**終pH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)正后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。培養(yǎng)基注意事項(xiàng)編輯語(yǔ)音培養(yǎng)基在使用前通過(guò)高壓或過(guò)濾滅菌。防止污染應(yīng)該注意以下事項(xiàng)：確認(rèn)工作細(xì)胞庫(kù)是否被污染，確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染，確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染，均可用細(xì)菌、***及支原體無(wú)菌試驗(yàn)來(lái)確認(rèn)并排除。同時(shí)要對(duì)無(wú)菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)際生產(chǎn)中，可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，48小時(shí)即可觀察有無(wú)污染。其它：高壓滅菌設(shè)備、過(guò)濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證，確保滅菌和除菌效果。金山區(qū)提供臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基售后服務(wù)

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