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寶山區(qū)有什么臨床微生物檢驗培養(yǎng)基基地

來源: 發(fā)布時間:2020-05-19

    如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術(shù)建立早期,體外培養(yǎng)細(xì)胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復(fù)雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。***使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。血清種類目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因:來源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過長時間的應(yīng)用考驗人們對其有比較深入的理解。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時使用其他動物血清更合適。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量**大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)**高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分**少。血清樣本血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚。證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的***物。寶山區(qū)有什么臨床微生物檢驗培養(yǎng)基基地

    兼性厭氧微生物在F值為+,在+。F值與氧分壓和pH有關(guān),也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對穩(wěn)定的條件下,可通過增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓,或加入氧化劑,從而增加F值;在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。5、原料來源的選擇在配制培養(yǎng)基時應(yīng)盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分,特別是在發(fā)酵工業(yè)中,培養(yǎng)基用量很大,利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟(jì)價值。例如,在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過程中,常常利用糖蜜(制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液)、豆制品工業(yè)廢液及黑廢液(造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等都可作為培養(yǎng)基的原料。再如,工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料,而在我國農(nóng)村,已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。另外,大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品,如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。6、滅菌處理要獲得微生物純培養(yǎng),必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進(jìn)行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言,更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。普陀區(qū)特色臨床微生物檢驗培養(yǎng)基質(zhì)量保證1.牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。

    培養(yǎng)基制備基本方法編輯語音培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外,一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料,加以比較核對,再依據(jù)自己的使用目的加以選用,記錄其來源。培養(yǎng)基的制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號。**終pH值、消毒的溫度和時間制各的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份,原記錄保存?zhèn)洳?,?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂,**好一次完成,不要中斷。可將配方置于傍側(cè),每稱完一種成分即在配方上做出記號,并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。培養(yǎng)基各成份的混合和溶化培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長。**好使用不銹鋼鍋加熱溶化,也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動,以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用。

    二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至,若pH值超過,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無血清培養(yǎng)基。四、***素為防止培養(yǎng)時期細(xì)菌的污染,可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)***素,一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/毫升,鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素(PHA)非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細(xì)胞,但在離體培養(yǎng)過程中,在PHA的作用下,可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂。經(jīng)實驗測定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時和68-72小時。PHA有粘多糖,蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA***的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細(xì)胞均被***為止,但PHA濃度過高會引起凝集,一般采用4%濃度為好。無細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細(xì)菌噬菌體污染。

    應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養(yǎng)基,應(yīng)先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,**后必須加以補(bǔ)足。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)整培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正,因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,例如,牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會有***的升高。因此,對這個步驟,操作者應(yīng)隨時注意探索經(jīng)驗、以期能掌握培養(yǎng)基的**終pH,保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)正后,還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘,以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。培養(yǎng)基注意事項編輯語音培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應(yīng)該注意以下事項:確認(rèn)工作細(xì)胞庫是否被污染,確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染,確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細(xì)菌、***及支原體無菌試驗來確認(rèn)并排除。同時要對無菌試驗培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗證。實際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗證,確保滅菌和除菌效果。用于取材的動物應(yīng)健康無病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi)。楊浦區(qū)有什么臨床微生物檢驗培養(yǎng)基服務(wù)費

價格昂貴,是構(gòu)成動物細(xì)胞培養(yǎng)對生產(chǎn)成本的主要部分之一。寶山區(qū)有什么臨床微生物檢驗培養(yǎng)基基地

    培養(yǎng)基化學(xué)分類編輯語音培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機(jī)營養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低,除在實驗室經(jīng)常使用外,也適于用來進(jìn)行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基組合培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計而配制的培養(yǎng)基。例如,高氏1號培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方,配制合成培養(yǎng)基時重復(fù)性強(qiáng),但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高,微生物在其中生長速度較慢,一般適于在實驗室用來進(jìn)行有關(guān)微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。[2]培養(yǎng)基半組合培養(yǎng)基指一類主要以化學(xué)試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如,馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。培養(yǎng)基物理分類編輯語音培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。寶山區(qū)有什么臨床微生物檢驗培養(yǎng)基基地

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