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靜安區(qū)現(xiàn)代臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基以客為尊

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2020-03-16

    二、培養(yǎng)基培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至,若pH值超過(guò),則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌,使用前需經(jīng)滅菌μm孔徑濾膜濾過(guò)處理。三、血清培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高壓滅菌,無(wú)菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定,一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制,可選用無(wú)血清培養(yǎng)基。四、***素為防止培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的污染,可在培養(yǎng)基中添加適當(dāng)***素,一般用量與組織細(xì)胞培養(yǎng)相同:卡那霉素100單位/毫升,或雙抗--青霉素100單位/毫升,鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素(PHA)非增殖期的細(xì)胞不能制備染色體,如人外周血淋巴細(xì)胞,但在離體培養(yǎng)過(guò)程中,在PHA的作用下,可被刺激轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂。經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)定其分裂高峰分別于培養(yǎng)后44-48小時(shí)和68-72小時(shí)。PHA有粘多糖,蛋白質(zhì)兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂,蛋白質(zhì)起凝集作用。PHA***的細(xì)胞數(shù)隨其濃度而增加,直至全部免疫活性細(xì)胞均被***為止,但PHA濃度過(guò)高會(huì)引起凝集,一般采用4%濃度為好。血清要通過(guò)濾膜過(guò)濾除菌,保證無(wú)菌。靜安區(qū)現(xiàn)代臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基以客為尊

    血清還含有一些微量元素和離子,他們?cè)诖x***中起重要作用,如SeO3、硒等。血清培養(yǎng)基主要問(wèn)題1.血清的成份可能有幾百種之多,對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制不清楚,尤其是對(duì)其中一些多肽類生長(zhǎng)因子、***和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí),這給研究工作帶來(lái)許多困難。2.血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。3.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞,在體內(nèi)狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學(xué)液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過(guò)程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)(成纖維細(xì)胞)同時(shí)***另一類細(xì)胞生長(zhǎng)(表皮細(xì)胞)。4.血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌***等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),甚至造成細(xì)胞死亡。5.動(dòng)物個(gè)體不同,血清產(chǎn)地、批號(hào)不同,每批質(zhì)量差異甚大,其成分不能保持一致。6.取材中可能帶入支原體、病毒,對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響,可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn)結(jié)果不可靠性。7.大規(guī)模生產(chǎn)中,血清來(lái)源越來(lái)越困難。長(zhǎng)寧區(qū)介紹臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基認(rèn)真負(fù)責(zé)WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求。

    培養(yǎng)基化學(xué)分類編輯語(yǔ)音培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指一類利用動(dòng)物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低,除在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用外,也適于用來(lái)進(jìn)行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基組合培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)而配制的培養(yǎng)基。例如,高氏1號(hào)培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方,配制合成培養(yǎng)基時(shí)重復(fù)性強(qiáng),但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高,微生物在其中生長(zhǎng)速度較慢,一般適于在實(shí)驗(yàn)室用來(lái)進(jìn)行有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測(cè)定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。[2]培養(yǎng)基半組合培養(yǎng)基指一類主要以化學(xué)試劑配制,同時(shí)還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如,馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。培養(yǎng)基物理分類編輯語(yǔ)音培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營(yíng)養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。

    對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養(yǎng)基用,℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過(guò)程中,長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養(yǎng)基常在,℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌,某些對(duì)糖類要求較高的培養(yǎng)基,可先將糖進(jìn)行過(guò)濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合;長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽(yáng)離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測(cè)定微生物生長(zhǎng)狀況的合成培養(yǎng)基時(shí),常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑,避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進(jìn)行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養(yǎng)基pH會(huì)發(fā)生改變(一般使pH降低),可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求,在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。在配制培養(yǎng)基過(guò)程中,泡沫的存在對(duì)滅菌處理極不利,因?yàn)榕菽械目諝庑纬筛魺釋?,使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時(shí)需要在培養(yǎng)基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產(chǎn)生,或適當(dāng)提高滅菌溫度。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。

    培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基指在液體培養(yǎng)基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基脫水培養(yǎng)基又稱預(yù)制干燥培養(yǎng)基,指含有除水分外的一切成分的商品培養(yǎng)基。培養(yǎng)基微生物分類編輯語(yǔ)音選擇性培養(yǎng)基:一類根據(jù)某微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基,具有使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌的功能,***用于菌種篩選等領(lǐng)域。鑒別培養(yǎng)基:一類在成分中加有能與目的菌的無(wú)色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑,從而達(dá)到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。例如,伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基(EMB)。培養(yǎng)基常見(jiàn)培養(yǎng)基編輯語(yǔ)音細(xì)菌培養(yǎng)基牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基牛肉膏,蛋白胨,氯化鈉,瓊脂,水100ml在燒杯內(nèi)加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號(hào)后,放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補(bǔ)足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到,分裝在各個(gè)試管里,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌:、121攝氏度維持15-30分鐘。牛心培養(yǎng)基細(xì)菌培養(yǎng)基取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號(hào),煮沸。1.牛血清必須來(lái)自有文件證明無(wú)牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。閔行區(qū)專注臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基售后服務(wù)

證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的***物。靜安區(qū)現(xiàn)代臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基以客為尊

    轉(zhuǎn)用文火燉2小時(shí)。過(guò)濾,濾出的肉末干燥處理,濾液pH值調(diào)到。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,備用。根瘤菌培養(yǎng)基葡萄糖10g,磷酸氫二鉀,碳酸鈣3g,硫酸鎂,酵母粉,水1000ml,1%結(jié)晶紫溶液1ml。先把瓊脂加水煮沸溶解,然后分別加入其他組分,攪拌使溶解后,分裝,滅菌,備用。放線菌培養(yǎng)基淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基(高氏一號(hào)培養(yǎng)基)可溶性淀粉,硝酸鉀,磷酸氫二鉀,氯化鈉,硫酸鎂,硫酸亞鐵,瓊脂2g,水100ml。先把淀粉放在燒杯里,用5ml水調(diào)成糊狀后,倒入95ml水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號(hào),加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解后,補(bǔ)足失水。調(diào)整pH值到,分裝后滅菌,備用。面粉瓊脂培養(yǎng)基面粉60g,瓊脂20g,水1000ml把面粉用水調(diào)成糊狀,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘。另取500ml水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調(diào)勻,補(bǔ)充水分,調(diào)整pH值到,分裝,滅菌,備用。微藻培養(yǎng)基BG-11培養(yǎng)基NaNO3,K2HPO4·,MgSO4·,CaCl2·CitricAcid(檸檬酸),F(xiàn)erricammoniumcitrate(檸檬酸鐵銨,EDTA(dinatrium-salt),Na2CO3,A5+Cosolution*(A5溶液1000×)1mlDistilledWater。靜安區(qū)現(xiàn)代臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基以客為尊

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