價格昂貴,是構(gòu)成動物細(xì)胞培養(yǎng)對生產(chǎn)成本的主要部分之一。血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應(yīng)健康無病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi),取材過程應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:1.牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。2.有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。3.證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的***物。4.血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。5.無細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細(xì)菌噬菌體污染。6.對細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。我國在對牛血清的質(zhì)量2000年版《中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求。包括蛋白質(zhì)含量,細(xì)菌、***、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)***,支持細(xì)胞增殖檢查。培養(yǎng)基培養(yǎng)基配制編輯語音一、配制用水培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬歐姆,一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。或加入氧化劑,從而增加F值;虹口區(qū)介紹干粉培養(yǎng)基及配套試劑創(chuàng)新服務(wù)
血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝***中起重要作用,如SeO3、硒等。血清培養(yǎng)基主要問題1.血清的成份可能有幾百種之多,對其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機制不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、***和脂類等尚未充分認(rèn)識,這給研究工作帶來許多困難。2.血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。3.對大多數(shù)細(xì)胞,在體內(nèi)狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學(xué)液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),血清可能促進某些細(xì)胞的生長(成纖維細(xì)胞)同時***另一類細(xì)胞生長(表皮細(xì)胞)。4.血清含一些對細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細(xì)菌***等都會影響細(xì)胞生長,甚至造成細(xì)胞死亡。5.動物個體不同,血清產(chǎn)地、批號不同,每批質(zhì)量差異甚大,其成分不能保持一致。6.取材中可能帶入支原體、病毒,對細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響,可能導(dǎo)致實驗失敗或?qū)嶒灲Y(jié)果不可靠性。7.大規(guī)模生產(chǎn)中,血清來源越來越困難。浦東新區(qū)個人干粉培養(yǎng)基及配套試劑認(rèn)真負(fù)責(zé)特別是在發(fā)酵工業(yè)中,培養(yǎng)基用量很大,利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟價值。
培養(yǎng)基化學(xué)分類編輯語音培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等。常用的天然有機營養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低,除在實驗室經(jīng)常使用外,也適于用來進行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基組合培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計而配制的培養(yǎng)基。例如,高氏1號培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等。合成培養(yǎng)基有一定的配方,配制合成培養(yǎng)基時重復(fù)性強,但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高,微生物在其中生長速度較慢,一般適于在實驗室用來進行有關(guān)微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。[2]培養(yǎng)基半組合培養(yǎng)基指一類主要以化學(xué)試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。例如,馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基。培養(yǎng)基物理分類編輯語音培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。
調(diào)整pH值到6。分裝,滅菌,備用。該培養(yǎng)基用于培養(yǎng)和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。***的培養(yǎng)基在植物組織培養(yǎng)時,通過調(diào)節(jié)IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽。CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽。CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化。愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基制備以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ),向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培養(yǎng)基后,再加入·L-1的BA8mL,·L-1的NAA8mL。然后加入實際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用·L-1的NaOH和mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至。加入14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。******葉片愈傷組織誘導(dǎo)取一無菌培養(yǎng)皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養(yǎng)皿中,并用解剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然后將其接種于準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基上,每瓶接種5小片,一共接種6瓶。接種后的三角平置于24條件下黑暗培養(yǎng)1周。在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽。
且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等,這些物質(zhì)對促進細(xì)胞生長或***生長活性是達到生理平衡的。血清主要作用1.提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無機物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。2.提供***和各種生長因子:胰島素、腎上腺皮質(zhì)***(氫化可的松、**)、類固醇***(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長因子如成纖維細(xì)胞生長因子、表皮生長因子、血小板生長因子等。3.提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及***等,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。4.提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機械損傷。5.對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護作用:有一些細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被***用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細(xì)胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,粘度起到重要作用。在pH相對穩(wěn)定的條件下,可通過增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓。松江區(qū)專注干粉培養(yǎng)基及配套試劑銷售電話
例如,在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過程中。虹口區(qū)介紹干粉培養(yǎng)基及配套試劑創(chuàng)新服務(wù)
兼性厭氧微生物在F值為+,在+。F值與氧分壓和pH有關(guān),也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對穩(wěn)定的條件下,可通過增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓,或加入氧化劑,從而增加F值;在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。5、原料來源的選擇在配制培養(yǎng)基時應(yīng)盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分,特別是在發(fā)酵工業(yè)中,培養(yǎng)基用量很大,利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟價值。例如,在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過程中,常常利用糖蜜(制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液)、豆制品工業(yè)廢液及黑廢液(造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等都可作為培養(yǎng)基的原料。再如,工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料,而在我國農(nóng)村,已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。另外,大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品,如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。6、滅菌處理要獲得微生物純培養(yǎng),必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言,更是要進行嚴(yán)格的滅菌。虹口區(qū)介紹干粉培養(yǎng)基及配套試劑創(chuàng)新服務(wù)
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