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青浦區(qū)個(gè)人臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基創(chuàng)新服務(wù)

來源: 發(fā)布時(shí)間:2020-01-03

    價(jià)格昂貴,是構(gòu)成動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)生產(chǎn)成本的主要部分之一。血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)血清質(zhì)量高低取決于兩方面因素:一是取材對(duì)象,二是取材過程。用于取材的動(dòng)物應(yīng)健康無病并且在指定的出生天數(shù)之內(nèi),取材過程應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,制備出的血清要經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定。WHO公布的《用動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求:1.牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。2.有些國(guó)家還要求牛血清來自未用過反芻動(dòng)物蛋白飼料的牛群。3.證明所用牛血清中不含對(duì)所生產(chǎn)疫苗病毒的***物。4.血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。5.無細(xì)菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國(guó)家要求無細(xì)菌噬菌體污染。6.對(duì)細(xì)胞有良好的支持繁殖作用。我國(guó)在對(duì)牛血清的質(zhì)量2000年版《中國(guó)生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》中提出比較嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求。包括蛋白質(zhì)含量,細(xì)菌、***、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細(xì)菌內(nèi)***,支持細(xì)胞增殖檢查。培養(yǎng)基培養(yǎng)基配制編輯語(yǔ)音一、配制用水培養(yǎng)基的大部分是水,所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn),水的電阻應(yīng)為200萬歐姆,一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。并應(yīng)具備適當(dāng)?shù)谋O(jiān)測(cè)系統(tǒng)。青浦區(qū)個(gè)人臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基創(chuàng)新服務(wù)

    且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、***、無機(jī)物等,這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或***生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。血清主要作用1.提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。2.提供***和各種生長(zhǎng)因子:胰島素、腎上腺皮質(zhì)***(氫化可的松、**)、類固醇***(雌二醇、睪酮、孕酮)等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。3.提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及***等,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。4.提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷。5.對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用:有一些細(xì)胞,如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被***用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí),粘度起到重要作用。浦東新區(qū)常規(guī)臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基以客為尊血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。

    血清還含有一些微量元素和離子,他們?cè)诖x***中起重要作用,如SeO3、硒等。血清培養(yǎng)基主要問題1.血清的成份可能有幾百種之多,對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制不清楚,尤其是對(duì)其中一些多肽類生長(zhǎng)因子、***和脂類等尚未充分認(rèn)識(shí),這給研究工作帶來許多困難。2.血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。3.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞,在體內(nèi)狀態(tài),血清不是它們接觸的生理學(xué)液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài),血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)(成纖維細(xì)胞)同時(shí)***另一類細(xì)胞生長(zhǎng)(表皮細(xì)胞)。4.血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì),如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)(如精胺、亞精胺)形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌***等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),甚至造成細(xì)胞死亡。5.動(dòng)物個(gè)體不同,血清產(chǎn)地、批號(hào)不同,每批質(zhì)量差異甚大,其成分不能保持一致。6.取材中可能帶入支原體、病毒,對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響,可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗或?qū)嶒?yàn)結(jié)果不可靠性。7.大規(guī)模生產(chǎn)中,血清來源越來越困難。

    如血漿、血清、***、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術(shù)建立早期,體外培養(yǎng)細(xì)胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復(fù)雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。***使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。血清種類目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因:來源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理解。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量**大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,具有極為重要的功能。牛血清分為小牛血清、新牛血清、胎牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。顯然,胎牛血清是品質(zhì)**高的,因?yàn)樘ヅ_€未接觸外界,血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分**少。血清樣本血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但還有一部分尚不清楚。一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。

    應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養(yǎng)基,應(yīng)先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,**后必須加以補(bǔ)足。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)整培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正,因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會(huì)有所變化,例如,牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會(huì)有***的升高。因此,對(duì)這個(gè)步驟,操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的**終pH,保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)正后,還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘,以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。培養(yǎng)基注意事項(xiàng)編輯語(yǔ)音培養(yǎng)基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應(yīng)該注意以下事項(xiàng):確認(rèn)工作細(xì)胞庫(kù)是否被污染,確認(rèn)毒種工作種子批是否被污染,確認(rèn)所用培養(yǎng)基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細(xì)菌、***及支原體無菌試驗(yàn)來確認(rèn)并排除。同時(shí)要對(duì)無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基的靈敏度進(jìn)行驗(yàn)證。實(shí)際生產(chǎn)中,可以從配制好的培養(yǎng)液中取少量加入營(yíng)養(yǎng)瓊脂于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),48小時(shí)即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設(shè)備、過濾除菌設(shè)備均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,確保滅菌和除菌效果。1.牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國(guó)家。奉賢區(qū)常見臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基以客為尊

價(jià)格昂貴,是構(gòu)成動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)生產(chǎn)成本的主要部分之一。青浦區(qū)個(gè)人臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基創(chuàng)新服務(wù)

    其功能是使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌,從而提高該菌的篩選效率。酵母菌富集培養(yǎng)基葡萄糖5%,尿素,硫化銨,磷酸二氫鉀,磷酸氫二鈉,七水合硫酸鎂,七水合硫酸鐵,酵母膏,孟加拉紅,Ashby無氮培養(yǎng)基富集好氧自生固氮菌甘露醇1%,磷酸二氫鉀,七水合硫酸鎂,氯化鈉,二水合硫酸鈣,碳酸鈣培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基編輯語(yǔ)音EMB培養(yǎng)基常用于鑒別蛋白胨10g,乳糖5g,蔗糖5g,磷酸氫二鉀2g,伊紅,美藍(lán),蒸餾水1000g,2216E培養(yǎng)基配方分離海洋微生物的培養(yǎng)基配方蛋白胨5g,酵母膏1g,磷酸高鐵,瓊脂15-20g,陳海水1000ml,煮沸氫氧化鈉(5%)的溶液調(diào)pH值伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基可用于檢測(cè)水中大腸桿菌的含量首先按以下組成配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基。蛋白胨10g,NaCl5g瓊脂15-20g將上述物質(zhì)溶解后,用蒸餾水定容至1000mL,調(diào)節(jié)pH為。滅菌后,冷卻至60℃左右,再按下面的比例,在無菌操作條件下加入滅菌的乳糖溶液、伊紅水溶液以及美藍(lán)水溶液。搖勻后,立即倒平板。溶液中的乳糖在高溫下會(huì)破壞,因此一般使用壓力為70kPa、溫度為115℃的條件滅菌20分鐘。基礎(chǔ)培養(yǎng)基100mL,20%乳糖溶液2mL2%伊紅水溶液2mL,培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基編輯語(yǔ)音天然培養(yǎng)基是指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基。青浦區(qū)個(gè)人臨床微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基創(chuàng)新服務(wù)

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