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微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基制備的要點(diǎn):調(diào)培養(yǎng)基pH,雖然中海培養(yǎng)基中含有緩沖物質(zhì),可以盡量使培養(yǎng)基的pH值保持在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi),但如果配制的培養(yǎng)基不能要求,則必須進(jìn)行必要的調(diào)整。如果您有校準(zhǔn)過的pH計(jì),則可以使用pH計(jì)。如果沒有,可以使用精確的pH試紙,然后根據(jù)需要使用1mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸進(jìn)行微調(diào)。使用0.1氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸進(jìn)行調(diào)整至所需的pH值。培養(yǎng)基有酸性或堿性,pH值一般為7.4~7.6。對(duì)于需要用氫氧化鈉高壓滅菌的介質(zhì),將pH調(diào)至比要求值高0.1~0.2個(gè)單位,因?yàn)橛脷溲趸c調(diào)節(jié)時(shí),高壓滅菌后介質(zhì)的pH值要降低0.1~0.2。如果微生物培養(yǎng)基中含有碳酸鈣,則無需調(diào)整pH值。培養(yǎng)基由于富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),易被污染或變質(zhì)。河北Systec培養(yǎng)基制備器
液體培養(yǎng)基:為確定液體培養(yǎng)基的生長(zhǎng)率,應(yīng)接種適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)物。下面介紹的是用定量、半定量和定性方法評(píng)估生長(zhǎng)率和選擇性的方法。所推薦的這些方法都是通過將液體培養(yǎng)基以傾注或劃線方式接種到瓊脂平板上培養(yǎng)后,計(jì)數(shù)或計(jì)算液體培養(yǎng)基分?jǐn)?shù)而得出其生長(zhǎng)數(shù)量的。對(duì)于液體培養(yǎng)基定性測(cè)試方法,則通過肉眼觀察來實(shí)現(xiàn)。目標(biāo)菌和非目標(biāo)菌的定量稀釋法步驟如下:選擇液體培養(yǎng)基10mL/管待檢。接種目標(biāo)菌:將少量測(cè)試菌株培養(yǎng)物(每管10CFU~100CFU)接種測(cè)試肉湯和標(biāo)準(zhǔn)肉湯,混勻。接種非目標(biāo)菌:將大量測(cè)試菌株培養(yǎng)物(每管大于1000CFU)接種測(cè)試肉湯和標(biāo)準(zhǔn)肉湯,混勻。湖北不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器固體培養(yǎng)基,一類配制成的固體狀態(tài)的基質(zhì)。
濕熱滅菌:濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進(jìn)行,高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min,具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基體積不應(yīng)超過1000mL,否則滅菌時(shí)可能會(huì)造成過度加熱。所有的操作應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)或使用說明的規(guī)定進(jìn)行。滅菌效果的控制是關(guān)鍵問題。加熱后采用適當(dāng)?shù)姆绞嚼鋮s,以防加熱過度。這對(duì)于大容量和敏感培養(yǎng)基十分重要,例如含有煌綠的培養(yǎng)基。過濾除菌:過濾除菌可在真空或加壓的條件下進(jìn)行。使用孔徑為0.2μm的無菌設(shè)備和濾膜。消毒過濾設(shè)備的各個(gè)部分或使用預(yù)先消毒的設(shè)備。一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)(如物品),為了達(dá)到有效過濾,應(yīng)事先將濾膜用無菌水潤(rùn)濕。
高效而強(qiáng)大的加熱和制冷系統(tǒng):功能強(qiáng)大的加熱器,能夠迅速加熱;快速制冷是通過循環(huán)水和壓力(加入內(nèi)部的軟化水產(chǎn)生的)所進(jìn)行的。利用與外部水連接的盤狀熱交換器,能夠使內(nèi)部迅速冷卻,整個(gè)過程包括:加熱、滅菌和冷卻(至50°C),依據(jù)容器的大小、培養(yǎng)基的數(shù)量和冷卻水的溫度,只需60-120分鐘即可完成。負(fù)載的壓力,有效地避免了培養(yǎng)基過溫失效和培養(yǎng)基中氣泡的產(chǎn)生??諝鈮嚎s機(jī)是內(nèi)置的。全自動(dòng)控制程序,確保內(nèi)部溫度均一,從而保證了配制和滅菌的培養(yǎng)基具有更高的質(zhì)量,整個(gè)過程,在一個(gè)設(shè)定溫度內(nèi),從z初的加熱到混合和滅菌,z后到冷卻,都是微處理器控制的,而且滅菌之后保持的溫度是可以預(yù)設(shè)的。殺菌劑裝入口寬大,并附有保險(xiǎn)鎖。殺菌劑可從此口加入,也可用注射器從硅酮膜注入。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。
微生物培養(yǎng)基制備:溶解滅菌后,盤子上無不溶性結(jié)晶紫、無紫色斑;與未溶解和消毒的盤子相比,盤子上有結(jié)晶紫和紫色斑點(diǎn)。因此正確的步驟順序是在高壓滅菌前需要進(jìn)行培養(yǎng)基煮沸溶解。先煮沸溶解后冷卻至二十五度,確定pH值;對(duì)需要高壓滅菌的介質(zhì)取平均值,高壓滅菌后冷卻至二十五度,這兩種狀況測(cè)量培養(yǎng)基pH值,固體培養(yǎng)基至少檢測(cè)兩個(gè)點(diǎn),取它們的平均值??刂婆囵B(yǎng)基在容器中不要超過百分之八十,避免填充過多。注意控制高壓滅菌時(shí)間過長(zhǎng)(115-116度)二十分鐘即可,溫度不超過121度,而且滅菌后的培養(yǎng)基在高溫環(huán)境中不要長(zhǎng)時(shí)間存放。固體培養(yǎng)基根據(jù)性質(zhì)又分為固化培養(yǎng)基、非可逆性固化培養(yǎng)基、天然固態(tài)培養(yǎng)基、濾膜。湖北不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器分裝好的培養(yǎng)基應(yīng)立即進(jìn)行滅菌。河北Systec培養(yǎng)基制備器
滅菌:分裝好的培養(yǎng)基應(yīng)立即進(jìn)行滅菌。滅菌的方法種類如下:1.高壓蒸汽滅菌法:大多數(shù)熱培養(yǎng)基都可用此法,小量分裝時(shí),用121℃、15min;滅菌量大時(shí),用121℃、30min滅菌;含糖類的培養(yǎng)基只能113℃~115℃、15min滅菌,避免糖類遭破壞。2.煮沸滅菌:對(duì)含有不耐高溫物質(zhì)的培養(yǎng)基,可使用此方法。3.過濾除菌:以過濾的方法除菌,用無菌操作技術(shù),定量加入培養(yǎng)基。血液、物品可用無菌操作技術(shù)抽取,加入冷卻到50℃左右的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)基含有不耐熱的物質(zhì)時(shí),可用此法。河北Systec培養(yǎng)基制備器