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固體斜面培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學(xué)藥品均應(yīng)是化學(xué)純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細(xì)菌不易生長。較好使用不銹鋼萵加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)擾動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應(yīng)重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。如為瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,較后必須加以補(bǔ)足。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正:因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會(huì)有所變化,培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應(yīng)進(jìn)行PH的初步調(diào)正。液體培養(yǎng)基在靜止的條件下,在菌體或培養(yǎng)細(xì)胞的周圍,形成透過養(yǎng)分的壁障,養(yǎng)分的攝入受到阻礙。山西實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器
濕熱滅菌:濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進(jìn)行,高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min,具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中的規(guī)定進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基體積不應(yīng)超過1000mL,否則滅菌時(shí)可能會(huì)造成過度加熱。所有的操作應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)或使用說明的規(guī)定進(jìn)行。滅菌效果的控制是關(guān)鍵問題。加熱后采用適當(dāng)?shù)姆绞嚼鋮s,以防加熱過度。這對(duì)于大容量和敏感培養(yǎng)基十分重要,例如含有煌綠的培養(yǎng)基。過濾除菌:過濾除菌可在真空或加壓的條件下進(jìn)行。使用孔徑為0.2μm的無菌設(shè)備和濾膜。消毒過濾設(shè)備的各個(gè)部分或使用預(yù)先消毒的設(shè)備。一些濾膜上附著有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)(如物品),為了達(dá)到有效過濾,應(yīng)事先將濾膜用無菌水潤濕。遼寧自動(dòng)培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂,較好一次完成,不要中斷。
培養(yǎng)基的儲(chǔ)存:干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處,要避免陽光直射;未開瓶的培養(yǎng)基在室溫下的較長保存2年,開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕,應(yīng)注意防潮并在6個(gè)月內(nèi)用完。應(yīng)定期對(duì)儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查,如容器密閉性復(fù)查、一次開封日期、內(nèi)容物的感官檢查,如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。培養(yǎng)基的制備和使用是微生物實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作的重要環(huán)節(jié),培養(yǎng)基自身質(zhì)量的優(yōu)劣、保存是否得當(dāng)、配制使用是否正確等都直接影響到檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
培養(yǎng)基制備的基本方法和注意事項(xiàng):1、培養(yǎng)基配方的選定同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外,一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料,加以比較核對(duì),再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。2、培養(yǎng)基的制備記錄每次制備培養(yǎng)基均應(yīng)有記錄,包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號(hào),好終pH值、消毒的溫度和時(shí)間制備的日期和制備者等,記錄應(yīng)復(fù)制一份,原記錄保存?zhèn)洳?,?fù)制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。3、培養(yǎng)基成分的稱取培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂,好好一次完成,不要中斷。可將配方置于傍側(cè),每稱完一種成分即在配方面軍做出記號(hào),并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。完全稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。有的培養(yǎng)基還含有素和色素,用于單種微生物培養(yǎng)和鑒定。
培養(yǎng)基配置原則:控制pH條件,培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi),以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的很適pH條件各不相同,一般來講,細(xì)菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長。值得注意的是,在微生物生長繁殖和代謝過程中,由于營養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累,會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,若不對(duì)培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制,往往導(dǎo)致微生物生長速度下降或(和)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性,KH2PO4溶液呈酸性,兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。配制培養(yǎng)基的原則:根據(jù)培養(yǎng)目的需要選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì)。內(nèi)蒙古大容量 培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器殺菌劑可從此口加入,也可用注射器從硅酮膜注入。山西實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器
根據(jù)培養(yǎng)基的用途來區(qū)分,可分為選擇培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。1)選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)以殺死或克制不需要的菌種生長的培養(yǎng)基,稱之為選擇培養(yǎng)基。如鏈霉素、氯霉素等克制原核微生物的生長;而制霉菌素、灰黃霉素等能克制真核微生物的生長;結(jié)晶紫能克制革蘭氏陽性細(xì)菌的生長等。2)增殖培養(yǎng)基在自然界中,不同種的微生物常生活在一起,為了分離我們所需要的微生物,在普通培養(yǎng)基中加入一些某種微生物特別喜歡的營養(yǎng)物質(zhì),以增加這種微生物的繁殖速度,逐漸淘汰其它微生物,這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基,這種培養(yǎng)基常用于菌種篩選和選擇增菌中。在某種程度上講,增殖培養(yǎng)基也是一種選擇培養(yǎng)基。3)鑒別培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品,使難以區(qū)分的微生物經(jīng)培養(yǎng)后呈現(xiàn)出明顯差別,因而有助開快速鑒別某種微生物。這樣的培養(yǎng)基稱之為鑒別培養(yǎng)基。例如用以檢查飲水和乳品中是否含有腸道致病菌的伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基就是一種常用的鑒別性培養(yǎng)基。山西實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器