在培養(yǎng)基中加入 HEPES 有何好處?培養(yǎng)基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽，它可提供營養(yǎng)，但卻在生理 pH 條件下會降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強的緩沖劑，能使細胞培養(yǎng)基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強。HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細胞時培養(yǎng)基脫離了 5%CO2 的環(huán)境，CO2 氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持 pH7.0 左右。一般在進行克隆化培養(yǎng)時要添加HEPES。神經(jīng)細胞原代培養(yǎng)的過程中能用到。培養(yǎng)基根據(jù)其組成、用途、酸堿度等不同因素分類，如營養(yǎng)瓊脂、LB培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基等。pH7.8磷酸鹽緩沖液

還有一些鑒別性培養(yǎng)基，是利用細菌特有的各種酶系統(tǒng)，能分解利用各種特定的糖、醇、氨基酸或其他基質而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)堿或產(chǎn)生其他可見物質，依此進行細菌的鑒別，例如常用的生化培養(yǎng)基。用于細菌生化特性試驗的培養(yǎng)基特點是在無糖的基礎培養(yǎng)基中加人某種特定的基質，并加人指示劑，細菌在此類培養(yǎng)基中的一系列生化反應結果，均通過指示劑顯示出來。此類培養(yǎng)基為生化反應鑒別培養(yǎng)基。根據(jù)用量又可分為常量生化培養(yǎng)基和微量生化培養(yǎng)基。值得注意的是生化試驗培養(yǎng)基的某些成分受高溫、pH等諸多因素的影響，在配制和使用時，應根據(jù)實際情況嚴格掌握，防止有效成分被破壞，以保障其使用效果。放線菌酮溶液培養(yǎng)基類型和配方可以根據(jù)需要進行定制，以滿足特定的實驗需求。

培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠低于6.8，則大多數(shù)細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養(yǎng)細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。

以MS培養(yǎng)基母液為基礎，向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL，微量元素100×母液20mL，鐵鹽100×母液20mL，維生素100×母液20mL，肌醇200×母液10mL，甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培養(yǎng)基后，再加入0.5mg·L-1的BA8mL，0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入實際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水，加入40g蔗糖后攪拌使其溶化，用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調整pH值至5.8-6.0。加入14g瓊脂，將鋁鍋置于電爐上，攪拌加熱使瓊脂完全溶化，然后用蒸餾水定容至終體積2L，繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。在培養(yǎng)細胞時通常還需要添加藥物，以防止細菌污染。

選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選效率。酵母菌富集培養(yǎng)基：葡萄糖5%，尿素0.1%，硫化銨0.1%，磷酸二氫鉀0.25%，磷酸氫二鈉0.05%，七水合硫酸鎂0.1%，七水合硫酸鐵0.01%，酵母膏0.05%，孟加拉紅0.003%，pH4.5。富集好氧自生固氮菌：甘露醇1%，磷酸二氫鉀0.02%，七水合硫酸鎂0.02%，氯化鈉0.02%，二水合硫酸鈣0.01%，碳酸鈣0.5%液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固態(tài)培養(yǎng)基是常用的培養(yǎng)基種類。放線菌酮溶液

培養(yǎng)基制備的質量和配方對于細胞和微生物的生長、分化和培養(yǎng)效果具有至關重要的作用。pH7.8磷酸鹽緩沖液

1951年厄爾開發(fā)了供動物細胞體外生長的人工合成培養(yǎng)基(MEM)。合成培養(yǎng)基的種類相當多。合成培養(yǎng)基成分已知，便于對實驗條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學成分所替代，因此，細胞培養(yǎng)中使用的基礎合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。普遍的作法是加入小牛血清。動物血清成分復雜，各種生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清對細胞生長很有效，但后期對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、提純以及檢測造會成一定困難。另外高質量的動物血清來源有限，成本高，限制了它的大量使用。無血清培養(yǎng)基不加動物血清，在基礎培養(yǎng)基中加入細胞生長有效因子等。pH7.8磷酸鹽緩沖液

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