培養(yǎng)基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基種類很多,根據(jù)配制原料的來源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基;根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基;根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等;根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測試并調(diào)節(jié)pH,還須進(jìn)行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì),易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置,現(xiàn)配現(xiàn)用。大多數(shù)細(xì)菌都能在富含有機(jī)物的基質(zhì)中繁殖生長,因此有機(jī)培養(yǎng)基是基本的培養(yǎng)基之一。厭氧培養(yǎng)液
合成培養(yǎng)基(synthetic medium) 由已知化學(xué)成分的營養(yǎng)物質(zhì)組成的培養(yǎng)基。根據(jù)微生物對營養(yǎng)要求的不同,可完全由無機(jī)鹽或化合物組成,如:氨基酸、糖、嘌呤、嘧啶、維生素等,其組成成分已知,只要嚴(yán)格操作,各批次間質(zhì)量可做到穩(wěn)定一致。此培養(yǎng)基可用來檢測某種營養(yǎng)物或藥物對微生物代謝的影響。組織細(xì)胞培養(yǎng)液均屬合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的成本較高,其價(jià)格相當(dāng)于同類天然培養(yǎng)基的幾倍以至于幾十倍。只含幾種無機(jī)鹽的合成培養(yǎng)基,只適用于自養(yǎng)菌的培養(yǎng),如培養(yǎng)亞硝化細(xì)菌、氧化硫桿菌等的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基大部分成分為已知化學(xué)結(jié)構(gòu)的營養(yǎng)物質(zhì),其中的個(gè)別或少數(shù)成分為未明化學(xué)成分的必須營養(yǎng)物,成為半合成培養(yǎng)基,如百日咳菌苗生產(chǎn)用的水解酪素培養(yǎng)基。棉子糖-組氨酸培養(yǎng)基培養(yǎng)基應(yīng)適合不同類型細(xì)菌的生長,包括需氧菌和厭氧菌。
細(xì)菌培養(yǎng)基之面粉瓊脂培養(yǎng)基:面粉60g,瓊脂20g,水1000ml把面粉用水調(diào)成糊狀,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘。另取500ml水,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,把兩液調(diào)勻,補(bǔ)充水分,調(diào)整pH值到7.4,分裝,滅菌,備用。微藻培養(yǎng)基,BG-11培養(yǎng)基:NaNO3 1.5g,K2HPO4 ·3H2O0.04g,MgSO4·7H2O0.075g,CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid (檸檬酸)0.006g,F(xiàn)erric ammonium citrate(檸檬酸鐵銨0.006g,EDTA (dinatrium-salt) 0.001g,Na2CO3 0.02g,A5 + Co solution * (A5溶液1000×)1ml Distilled Water (蒸餾水)919ml。
細(xì)菌培養(yǎng)基之根瘤菌培養(yǎng)基:葡萄糖10g,磷酸氫二鉀0.5g,碳酸鈣3g,硫酸鎂0.2g,酵母粉0.4瓊脂20g,水1000ml,1%結(jié)晶紫溶液1ml。先把瓊脂加水煮沸溶解,然后分別加入其他組分,攪拌使溶解后,分裝,滅菌,備用。放線菌培養(yǎng)基:(1)淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基(高氏一號培養(yǎng)基)可溶性淀粉2.0g,硝酸鉀0.1g,磷酸氫二鉀0.05g,氯化鈉0.05g,硫酸鎂0.05g,硫酸亞鐵0.001g,瓊脂2g,水100ml。先把淀粉放在燒杯里,用5ml水調(diào)成糊狀后,倒入95ml水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解。在燒杯外做好記號,加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂,不停攪拌,待瓊脂完全溶解后,補(bǔ)足失水。調(diào)整pH值到7.2-7.4,分裝后滅菌,備用。培養(yǎng)基是細(xì)胞和微生物生長所需的基本營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。
要獲得微生物純培養(yǎng),必須避免雜菌污染,因此對所用器材及工作場所進(jìn)行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言,更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。對培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2,121.3℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中,長時(shí)間高溫會使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞,如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2,112.6℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌,某些對糖類要求較高的培養(yǎng)基,可先將糖進(jìn)行過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合。為了避免細(xì)胞爆破釋放DNA和蛋白質(zhì),培養(yǎng)基中常常添加DNA酶和蛋白酶等酶類。生物素測定培養(yǎng)基
Luria-Bertani 培養(yǎng)基是一種常用的細(xì)菌培養(yǎng)基,可用于大腸桿菌 E. coli 的培養(yǎng)。厭氧培養(yǎng)液
胰島素(Insulin)作用普遍,包括調(diào)節(jié)脂肪和蛋白質(zhì)的代謝以及促進(jìn)細(xì)胞生長等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對細(xì)胞的作用,進(jìn)而引起組織乃至機(jī)體的整體反應(yīng)。一般可將胰島素在細(xì)胞水平的作用分為三大類:代謝作用、促生長作用、以及代謝和促生長混合作用。胰島素對細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)作用主要是通過其與細(xì)胞膜上的胰島素受體(Insulin receptor, IR)相互作用而介導(dǎo),而胰島素對細(xì)胞的促生長作用則是通過其與細(xì)胞膜上胰島素的樣生長的因子受體(IGF Receptor, IG)相互作用而介導(dǎo)的。在無血清細(xì)胞培養(yǎng)液中,常添加胰島素來維持細(xì)胞生長,調(diào)節(jié)細(xì)胞對葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存,同時(shí)抑制糖原、蛋白質(zhì)和脂肪的分解。厭氧培養(yǎng)液
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