要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對(duì)所用器材及工作場(chǎng)所進(jìn)行消毒與滅菌。對(duì)培養(yǎng)基而言，更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中，長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞，如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌，某些對(duì)糖類要求較高的培養(yǎng)基，可先將糖進(jìn)行過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合。培養(yǎng)基制備的質(zhì)量和配方對(duì)于細(xì)胞和微生物的生長(zhǎng)、分化和培養(yǎng)效果具有至關(guān)重要的作用。MH瓊脂

什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。酚紅本身對(duì)生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生影響，可以通過純化技術(shù)去除，但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細(xì)胞生長(zhǎng)，當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分，很多國(guó)外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基。研究表明，酚紅可以模擬固醇類的作用。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞，尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測(cè)，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。6.5%氯化鈉葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基是細(xì)胞和微生物生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。

HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s（2.2g/L） 中比在 Hanks′（0.35g/L）中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡，以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中，溶液會(huì)變堿，Hanks′液在 CO2 培養(yǎng)箱中會(huì)變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagle′s液，如果只是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks′液就可以了。由于大多數(shù)細(xì)胞適宜pH為7.2-7.4，偏離此范圍可能對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對(duì)pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)細(xì)胞一般對(duì)pH變動(dòng)耐受差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。但總體來說，細(xì)胞耐酸性比耐堿性強(qiáng)一些。在配制培養(yǎng)用液時(shí)，需要注意一點(diǎn)：新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時(shí)，溶液的pH 還會(huì)向上浮動(dòng)0.2左右。

長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子（特別是鈣、鎂、鐵離子）結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀，因此，在配制用于觀察和定量測(cè)定微生物生長(zhǎng)狀況的合成培養(yǎng)基時(shí)，常需在培養(yǎng)基中加入少量螯合劑，避免培養(yǎng)基中產(chǎn)生沉淀，常用的螯合劑為乙二胺四乙酸（EDTA）。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進(jìn)行滅菌，然后再混合，避免形成沉淀；高壓蒸汽滅菌后，培養(yǎng)基pH會(huì)發(fā)生改變（一般使pH降低），可根據(jù)所培養(yǎng)微生物的要求，在培養(yǎng)基滅菌前后加以調(diào)整。大多數(shù)細(xì)菌都能在富含有機(jī)物的基質(zhì)中繁殖生長(zhǎng)，因此有機(jī)培養(yǎng)基是基本的培養(yǎng)基之一。

鑒別培養(yǎng)基(differential media) 在培養(yǎng)基中加入某一反應(yīng)底物和指示劑，以區(qū)別某些微生物的特性從而鑒別之。又分一般鑒別培養(yǎng)基和選擇性鑒別培養(yǎng)基。只用于區(qū)別不同微生物種類的培養(yǎng)基稱為-般鑒別培養(yǎng)基，此類培養(yǎng)基中一般不加抑菌劑而只含指示劑，如克氏雙糖鐵培養(yǎng)基，含有葡萄糖及乳糖，以酚紅作為指示劑，觀察培養(yǎng)基底層與斜面的顏色變化判定細(xì)菌對(duì)葡萄糖和乳糖的發(fā)酵能力，加人檸檬酸鐵銨，培養(yǎng)后觀察是否產(chǎn)生黑色沉著以判定細(xì)菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而產(chǎn)生硫化氫；又如伊紅-美藍(lán)瓊脂，含有乳糖(反應(yīng)底物)、伊紅-美藍(lán)(指示劑)用以鑒別大腸埃希菌、腸道病原菌和其他雜菌。一般鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)是在配方中都含有指示劑，并可用于區(qū)別不同種類的微生物，有些鑒別培養(yǎng)基也可同時(shí)作為細(xì)菌的特殊需要用來分離培養(yǎng)某些細(xì)菌，如胰酪胨大豆瓊脂和巧克力色血瓊脂。有些細(xì)胞需要在低溫下培養(yǎng)，這時(shí)需要特殊的培養(yǎng)基。膽鹽乳糖培養(yǎng)基(BL)

葡萄糖瓊脂 動(dòng)力-吲哚-尿素(MIU)培養(yǎng)基基礎(chǔ) V-P半固體瓊脂(VP) 西蒙氏檸檬酸鹽瓊脂枸櫞酸鹽瓊脂。MH瓊脂

培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類型微生物的生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的較適pH條件各不相同，一般來講，細(xì)菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長(zhǎng)，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長(zhǎng)。值得注意的是，在微生物生長(zhǎng)繁殖和代謝過程中，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化，若不對(duì)培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制，往往導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)速度下降或（和）代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此，為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定，通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑，常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽（如KH2PO4和K2HPO4）組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性，KH2PO4溶液呈酸性，兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。當(dāng)培養(yǎng)基中酸性物質(zhì)積累導(dǎo)致H+濃度增加時(shí)，H+與弱堿性鹽結(jié)合形成弱酸性化合物，培養(yǎng)基pH不會(huì)過度降低；如果培養(yǎng)基中OH-濃度增加，OH-則與弱酸性鹽結(jié)合形成弱堿性化合物，培養(yǎng)基pH也不會(huì)過度升高。MH瓊脂

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