選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑),標本接種于此類培養(yǎng)基后,由于抑菌劑的選擇性抑制作用,使非目的菌受到不同程度的抑制,更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過一定時間的增菌培養(yǎng),再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基,可以提高目的菌的陽性檢出率。抑菌劑的種類很多,常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉等。抑菌劑的加入量要適宜、準確,有的劇毒,有的不耐高熱,配制時須特別注意。細菌L型分離瓊脂 L型細菌高滲鹽增菌培養(yǎng)基 幽門螺桿菌液體培養(yǎng)基基礎 ATYP培養(yǎng)基 ATYP瓊脂。改良霍格蘭氏營養(yǎng)液
營養(yǎng)培養(yǎng)基(nutrient media) 在基礎培養(yǎng)基中添加一些特殊的營養(yǎng)物質(zhì),如葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏、生長因子等,可供營養(yǎng)要求較高的細菌在其中生長。例如鏈球菌、肺炎鏈球菌等需在含血液或血清的培養(yǎng)基中生長;結核分枝桿菌的培養(yǎng)基中須添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。比較常用的營養(yǎng)培養(yǎng)基是血瓊脂平板。增菌培養(yǎng)基(enrichment media) 一般為液體培養(yǎng)基,用于細菌的增菌培養(yǎng),可泛用,也可專門用的,在專門用的增菌培養(yǎng)基中常含有目的菌生長所需要的特殊營養(yǎng)物質(zhì)或生長因子。肉湯培養(yǎng)基(測磷細菌菌數(shù))乳酸菌氯霉素肉湯1 乳酸菌氯霉素瓊脂2 Raka-Ray瓊脂 改良M17培養(yǎng)基AAM培養(yǎng)基 LC瓊脂。
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在 Eagle′s(2.2g/L) 中比在 Hanks′(0.35g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡,以維持溶液的 PH 值。Eagle′s 液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hanks′液在 CO2 培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,需要用Eagle′s液,如果只是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,用Hanks′液就可以了。由于大多數(shù)細胞適宜pH為7.2-7.4,偏離此范圍可能對細胞生長將產(chǎn)生有害的影響。但各種細胞對pH的要求也不完全相同,原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些。在配制培養(yǎng)用液時,需要注意一點:新配的培養(yǎng)基在經(jīng)過 0.10um 或 0.22um 濾膜過濾時,溶液的pH 還會向上浮動0.2左右。
不同類型微生物生長對氧化還原電位(F)的要求不一樣,一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時可正常生長,一般以+0.3—+0.4V為宜,厭氧性微生物只能在F值低于+0.1V條件下生長,兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時進行好氧呼吸,在+0.1V以下時進行發(fā)酵。F值與氧分壓和pH有關,也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對穩(wěn)定的條件下,可通過增加通氣量(如振蕩培養(yǎng)、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓,或加入氧化劑,從而增加F值;在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸、硫化氫、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值。有機磷細菌培養(yǎng)基不含瓊脂 細胞壁缺陷型細菌培養(yǎng)基YPG培養(yǎng)基有機磷細菌培養(yǎng)基肉湯培養(yǎng)基(測磷細菌菌數(shù))。
什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅?酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。酚紅本身對生物制品質(zhì)量并不會產(chǎn)生影響,可以通過純化技術去除,但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡,影響細胞生長,當然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分,很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基。研究表明,酚紅可以模擬固醇類的作用。為避免固醇類反應,培養(yǎng)細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基。KF鏈球菌瓊脂 Slantez and Bartley培養(yǎng)基 TYC瓊脂培養(yǎng)基 腸球菌推定肉湯(EP肉湯)。三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基
脫硫弧菌培養(yǎng)基基礎 Waksman液體培養(yǎng)基 Starky液體培養(yǎng)基 Starky硫代硫酸鈉液體培養(yǎng)基。改良霍格蘭氏營養(yǎng)液
細胞培養(yǎng)過程中,細胞培養(yǎng)基是不可或缺的,細胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎物質(zhì),也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。通常細胞體外培養(yǎng)時需要加入血清,以維持細胞的生長和存活。而除了血清之外,部分細胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分來維持細胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細胞加入量會有差異,需根據(jù)細胞類型判斷。改良霍格蘭氏營養(yǎng)液
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