細(xì)胞培養(yǎng)過程中,細(xì)胞培養(yǎng)基是不可或缺的,細(xì)胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細(xì)胞中供給細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞生殖增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是培養(yǎng)細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。通常細(xì)胞體外培養(yǎng)時需要加入血清,以維持細(xì)胞的生長和存活。而除了血清之外,部分細(xì)胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol)等成分來維持細(xì)胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細(xì)胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細(xì)胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細(xì)胞加入量會有差異,需根據(jù)細(xì)胞類型判斷。自誘導(dǎo)SB肉湯培養(yǎng)基 2×YT瓊脂 雙倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液。豆芽汁葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi),以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的較適pH條件各不相同,一般來講,細(xì)菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長。值得注意的是,在微生物生長繁殖和代謝過程中,由于營養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累,會導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,若不對培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制,往往導(dǎo)致微生物生長速度下降或(和)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此,為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性,KH2PO4溶液呈酸性,兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。當(dāng)培養(yǎng)基中酸性物質(zhì)積累導(dǎo)致H+濃度增加時,H+與弱堿性鹽結(jié)合形成弱酸性化合物,培養(yǎng)基pH不會過度降低;如果培養(yǎng)基中OH-濃度增加,OH-則與弱酸性鹽結(jié)合形成弱堿性化合物,培養(yǎng)基pH也不會過度升高。甘露醇鹽瓊脂酚類與醇類消毒劑中和肉湯含氯碘和過氧化物消毒劑中和肉湯培養(yǎng)基 洗必泰與季銨鹽類消毒劑中和肉湯培養(yǎng)基。
在培養(yǎng)基中加人某種抑制劑和指示劑,抑制某些細(xì)菌生長,促進(jìn)目的菌的繁殖,并使所生長的細(xì)菌菌落具有一定特征,以助鑒別挑選,這類培養(yǎng)基稱為選擇性鑒別培養(yǎng)基。如SS瓊脂,在該培養(yǎng)基配方中含有乳糖(反應(yīng)底物)、中性紅和檸檬酸鐵銨(指示劑)、燦爛綠及膽鹽等(抑菌劑)。燦爛綠和膽鹽等抑菌劑能抑制革蘭氏陽性菌及部分大腸埃希菌的生長,而對沙門菌及志賀菌基本無影響,而且大腸埃希菌能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸,使菌落變紅色,沙門菌和志賀菌不發(fā)酵乳糖,其菌落為無色。如細(xì)菌產(chǎn)生硫化氫,則與檸檬酸鐵銨反應(yīng)生成硫化亞鐵沉淀,菌落中心呈黑色或褐色。以此達(dá)到鑒別的目的。
總體而言,所有微生物生長繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子、水及能源,但由于微生物營養(yǎng)類型復(fù)雜,不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的,因此首先要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強(qiáng)的培養(yǎng)基。自養(yǎng)型微生物能從簡單的無機(jī)物合成自身需要的糖類、脂類、蛋白質(zhì)、核酸、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物,因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以(或應(yīng)該)由簡單的無機(jī)物組成。例如,培養(yǎng)化能自養(yǎng)型的氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxdans)的培養(yǎng)基組成見表3.9。在該培養(yǎng)基配制過程中并未專門加入其他碳源物質(zhì),而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源。Falkow氏脫羧酶肉湯 枸櫞酸鹽培養(yǎng)基 溴甲酚紫牛乳培養(yǎng)基紫牛乳培養(yǎng)基 索恩利氏培養(yǎng)基 7%氯化鈉胰胨水培養(yǎng)基 。
在配制培養(yǎng)基時應(yīng)盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分,特別是在發(fā)酵工業(yè)中,培養(yǎng)基用量很大,利用低成本的原料更體現(xiàn)出其經(jīng)濟(jì)價值。例如,在微生物單細(xì)胞蛋白的工業(yè)生產(chǎn)過程中,常常利用糖蜜(制糖工業(yè)中含有蔗糖的廢液)、乳清(乳制品工業(yè)中含有乳糖的廢液)、豆制品工業(yè)廢液及黑廢液(造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸紙漿)等都可作為培養(yǎng)基的原料。再如,工業(yè)上的甲烷發(fā)酵主要利用廢水、廢渣作原料,而在我國農(nóng)村,已推廣利用人畜糞便及禾草為原料發(fā)酵生產(chǎn)甲烷作為燃料。另外,大量的農(nóng)副產(chǎn)品或制品,如鼓皮、米糠、玉米漿、酵母浸膏、酒糟、豆餅、花生餅、蛋白胨等都是常用的發(fā)酵工業(yè)原料。PTYG培養(yǎng)基 改良巴爾斯氏培養(yǎng)基基礎(chǔ)不含硫酸亞鐵銨 BM液體培養(yǎng)基 BM固體培養(yǎng)基 PS培養(yǎng)基/消化球菌肉湯培養(yǎng)基。無機(jī)磷細(xì)菌培養(yǎng)基(不含瓊脂)
磷酸鹽葡萄糖胨水培養(yǎng)基 柯氏尿素瓊脂基礎(chǔ) Hugh-Leifson培養(yǎng)基(不含葡萄糖) (O/F) 半固體營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。豆芽汁葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
細(xì)胞培養(yǎng)液(liquid of culture cellulae) 是指用于各種目的的體外培養(yǎng)、保存、運(yùn)輸活組織及細(xì)胞的液體,實(shí)質(zhì)為人工模擬體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境,使細(xì)胞在此環(huán)境中有生長和繁殖的能力。由于其成分?jǐn)?shù)量明確并可通過調(diào)節(jié)某一種成分來觀察被研究對象的各種生物學(xué)改變,被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)科的研究。細(xì)胞培養(yǎng)液的組成成分主要有水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子、生長因子等,這些成分必須通過嚴(yán)格挑選,嚴(yán)格測試后方可使用,所用的水必須達(dá)到2級試驗(yàn)用水(CB/T 6682-1992),所用的器皿必須清潔無污并進(jìn)行高壓滅菌或干烤去熱源處理。豆芽汁葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
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