鼠尾膠原,是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進體外培養(yǎng)細胞(特別是上皮細胞)貼壁的作用,同時也是一種天然的黏附劑,當我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內放置小玻片,制備細胞爬片時,可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。有點學術了,聽不懂···貼壁,有什么意義?分散的單一細胞培養(yǎng)能夠比較理想地反映細胞的具體生物特性。選擇合適的培養(yǎng)基,可以解決培養(yǎng)中細胞脫落和細胞重聚的現(xiàn)象。鼠尾膠原,是一種細胞支持物,它是細胞外基質的主要成份,可直接或間接參與細胞的附著。鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無菌下制備,純度達到95%以上,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細胞培養(yǎng)皿的包被,特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng);也可用于制備三維膠原凝膠,使細胞在模擬的三維環(huán)境中生長。鼠尾膠原醋酸溶解:在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。濟南鼠尾膠原銷售廠家
膠原蛋白(Collagen)是結締組織和內臟部位外基質的主要成分,但在皮膚、肌腱、骨骼中分布*為普遍。膠原蛋白在結構和遺傳學上被分為不同類型,I型膠原蛋白(Collagen, Type I)結構上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體,在37℃中性條件下可形成3股螺旋結構,被普遍用于多種細胞的培養(yǎng)基質,如肝細胞、纖維細胞、脊髓神經節(jié)、雪旺氏細胞等。另外,I型膠原蛋白在細胞生長、分化、遷移和組織態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應用。注意事項:1) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。2) 整個操作請于冰上進行,因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠。3) 整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作,避免污染以影響細胞生長。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。金華正規(guī)鼠尾膠原產品介紹制備鼠尾膠原:重復步驟2、3,直至尾腱量夠用。
鼠尾膠原:1實驗制備:實驗設備及材料:大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養(yǎng)瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。 實驗內容:1、制備鼠尾膠原(兩個同學一組操作)。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內。實驗步驟:制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘;2、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的較高,折斷尾骨后拉出尾腱;3、將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡;4、重復步驟2、3,直至尾腱量夠用;5、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克)。
鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進體外培養(yǎng)細胞(特別是上皮細胞)貼壁的作用,同時它也是一種天然的黏附劑,當我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內放置小玻片,制備細胞爬 片時,可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。通 過本實驗可掌握鼠尾膠原的制備方法,以及如何切割小玻片,并利用鼠尾膠原將其固定于 培養(yǎng)瓶內。 實驗設備及材料: 大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理 鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養(yǎng)瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。 實驗內容: 1、制備鼠尾膠原。 2、切割小玻片。 3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內。鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便。
膠原蛋白的提取方法:酶法提?。好阜ㄌ崛∈抢玫鞍酌甘鼓z原溶解,水解條件溫和,反應速率快,提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結構,蛋白純度高,理化性質穩(wěn)定,且無環(huán)境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復合酶。工藝可選擇一步法,即利用酶液直接提??;二步法,即先用酸或者堿進行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預處理革屑,然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產物。Cabeza L.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白,探討了酶和酶的加入量對提取結果的影響,給出了酶對膠原提取較佳工藝配比,酶與牛腱的質量比為0.1時效果較佳,而使用無花果蛋白酶時,0.01的配比較佳。整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作,避免污染以影響細胞生長。石家莊鼠尾膠原服務電話
鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上, pH 左右時可形成具有一定強度三維膠。濟南鼠尾膠原銷售廠家
鼠尾膠原凝膠體在皮膚細胞原代培養(yǎng)中的應用:在國外的藥理,毒理和皮膚病學的研究領域中已得到 的限翩,否則培養(yǎng)成功率極低.本文采用鼠尾膠原凝膠體作為滋養(yǎng)層,提高了培養(yǎng)細胞的 材料和方法r1]實驗材料:培養(yǎng)液DEIdE(G皿}ao),表皮細胞生長因子(EGF Sigma),小牛血清(上海祟明生物制品廠),氫化可的松,胰島素(Sigm,青,鏈霉素,胰 蛋白酶,]~DTA,細胞培養(yǎng)皿~35mill(00rningrSA).(2)皮膚基底細胞的分離和細胞 懸液的制備:2~3d的新生大鼠(wisr),以75%酒精消毒背部皮膚,剪下 皮膚后.以 消化12h.輕刷表皮面,收集細胞懸液,加入細胞培養(yǎng)液. 用梯度離心收集細胞,以3xi0/m]濃度接種平 皿.(3)鼠尾膠原 凝膠體的制備:具體方法參見文獻c13o(4)培養(yǎng)皿的膠原鋪制:i.0ml的酸溶解膠原滴 入~35mm培養(yǎng)皿中,鋪滿平皿底部;將平皿暴露于氨氣中30min,然后置空氣中 30rain,散盡剩余氨氣。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。濟南鼠尾膠原銷售廠家