影響轉染試驗的因素：1.轉染試劑跟細胞系不匹配轉染試劑跟細胞系也是講究配合默契的，使用同一種試劑，不同細胞系轉染效率通常不同。但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉染實驗前應根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉染試劑。每種轉染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇較適合實驗設計的轉染試劑。當然，較適合的是高效、低毒、方便、廉價的轉染試劑。因為有些細胞系是不穩(wěn)定的，可能隨著培養(yǎng)時間的改變，培養(yǎng)條件的不同，不同的選擇壓力，可能引起不同的克隆選擇。因此就算是同一個細胞系，在不同條件下轉染能力的差異可能會很大。通過實驗優(yōu)化合適的轉染條件對于轉染效率的提高很重要。合肥細胞高效轉染試劑廠家現(xiàn)貨

細胞轉染的常用方法：細菌轉染：原理：對于用脂質體不能實現(xiàn)轉染的細胞，可以采用細菌轉染。可用于蛋白質過表達或克制，是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉染細胞、原代細胞的穩(wěn)定性轉染。實驗步驟：通過基因克隆生成重組細菌 → 采用非細菌法轉染包裝細胞系，擴增并分離得到重組細菌顆?！兓⒌味毦骸D導目的細胞（含有細菌特異性的受體）→去除培養(yǎng)物中的細菌，并加入新鮮培養(yǎng)基→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。合肥細胞高效轉染試劑廠家現(xiàn)貨其可降解性對體內應用也具有重要的意義。

細胞轉染的注意事項：細胞狀態(tài)這點非常重要，不要急于求成，一定要讓細胞處于較佳的生長狀態(tài)再做。有文獻說傳代不要超過17代。細胞復蘇后的3代左右時細胞狀態(tài)較好，不要用傳了很多代的細胞去做，細胞的形態(tài)都會發(fā)生變化。大多數(shù)已建立的細胞系都是非整倍體，原代培養(yǎng)包括了表達不同基因組合的細胞的混合物。細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。如果隨時間發(fā)現(xiàn)這種變化，融化一管新鮮的細胞可能會恢復原先的轉染活性。因此，如果觀察到轉染效率降低，可以試著轉染新鮮培養(yǎng)的細胞以恢復較佳結果?；蛘?，幾種來源于經(jīng)篩選，轉染效率較高細胞亞系的細胞系現(xiàn)在有售。

細胞轉染方法：1.脂質體轉染法陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內，形成DNA脂復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內吞進入細胞。脂質體轉染適用于把DNA轉染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前實驗室較方便的轉染方法之一，其轉染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質體對細胞有一定的毒性，所以轉染時間一般不超過24小時。常用細胞類型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等2.電穿孔轉染法電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內，這種方法就是電穿孔。當遇到某些脂質體轉染效率很低或幾乎無法轉入時建議用電穿孔法轉染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70% 的細胞?，F(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉保護劑，可以較大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉染效率。必須通過對藥物的抗性篩選進行擴增或通過表型變化進行鑒定。

影響轉染試驗的因素：細胞狀態(tài)變化：（1）轉染試劑與細胞不匹配細胞轉染較適合的不是原代細胞，也不是傳代很多次的細胞。這是因為細胞培養(yǎng)在實驗室中保存數(shù)月和數(shù)年后會經(jīng)歷突變，總染色體重組或基因調控變化等而演化。這會導致和轉染相關的細胞行為的變化。較適合轉染的細胞是經(jīng)過幾次傳代后達到對數(shù)生長期的細胞，細胞生長旺盛，較容易轉染。（2）把握時機沒錯！轉染也有適當?shù)臅r機，相比較非分裂細胞——分裂細胞往往要比靜止細胞更易于攝取并表達外源DNA。因此對大多數(shù)轉染操作而言，細胞都在轉染當天或前現(xiàn)在種板。同樣重要的是細胞在種板進行轉染時不應處于過度生長的狀態(tài)，如細胞數(shù)量過多，互相疊加，營養(yǎng)物質耗竭，代謝廢物積聚，轉染率低下也是很正常的！一般的瞬時轉染 方法多采用脂質體法。合肥細胞高效轉染試劑廠家現(xiàn)貨

在瞬時轉染質粒中往往都含有一個報告基。合肥細胞高效轉染試劑廠家現(xiàn)貨

細胞轉染的注意事項：轉染是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。分為物理介導方法：電穿孔法、顯微注射和基因；化學介導方法：如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法：有較為原始的原生質體轉染，和現(xiàn)在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是細菌轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。其它物理和化學介導的轉染方法，則各有其特點。需要指出的一點，無論采用哪種轉染技術，要獲得較優(yōu)的轉染結果，可能都需要對轉染條件進行優(yōu)化。影響轉染效率的因素很多，從細胞類型、細胞培養(yǎng)條件和細胞生長狀態(tài)到轉染方法的操作細節(jié)。合肥細胞高效轉染試劑廠家現(xiàn)貨