提取鼠尾腱膠原工藝的優(yōu)化：單因素分析,膠原提取率在一定參數范圍內隨浸提時間、乙酸濃度及料液比的增加而增加。正交試驗,鼠尾腱膠原提取的較佳工藝參數為浸提時間72h、乙酸濃度0.5mol·L-1、料液比為1∶40。SDS-PAGE電泳顯示,樣品為Ⅰ型膠原,單寧酸沉淀實驗顯示膠原降解程度低,傅里葉紅外光譜顯示膠原結構完整。樣品氨基酸含量測定符合膠原蛋白的成分特征。中性膠原溶液在37℃時能夠形成固態(tài)膠原凝膠,膠原凝膠經過碳化二亞胺(EDC)交聯后,掃描電鏡下顯示內部相互連接,構成孔徑適中的蜂窩狀多孔結構。結論:成功建立并優(yōu)化鼠尾腱膠原蛋白的提取工藝,得出浸提時間、乙酸濃度及料液比等因素的較佳工藝參數,有效提高了鼠尾腱膠原的提取效率。放上小玻片，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。昆明鼠尾膠原廠家

簡介：鼠尾I型膠原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備，純度達到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細胞在模擬的三維環(huán)境中生長。質量標準：1、SDS-PAGE分析純度大于95%。2、無菌檢驗結果為陰性。3、本品2μg/cm2包被細胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細胞，貼壁及生長正常。4、本品濃度1mg/mL，pH7.0時形成具有一定強度的三維膠原凝膠，NIH-3T3細胞在三維凝膠內生長正常、PC-12細胞在三維凝膠表面生長正常。開封鼠尾膠原銷售廠家按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。

詳細步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2.將尾巴剪開、去掉皮毛，并剪成小段（3cm左右），抽出銀色的尾鍵；3.把剪碎的尾鍵置于150ml，0.1％消過毒的醋酸中，4℃放置，并不時振蕩；4.48h后取上清，4000轉離心30min后，取上清；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存。有時可繼續(xù)向4。中沉淀中加入10－20ml醋酸，重復以上步驟，以制備更多的鼠尾膠。在使用時，先將冰存的膠原液在室溫下解凍，再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿：1）用吸管吸取膠原液，在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液。2）若包被的是培養(yǎng)瓶，可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻。讓氨氣充入瓶內后，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養(yǎng)皿或板的話，可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內，將浸有氨水的棉球放入飯盒內，蓋緊飯盒蓋，四周用封口膠封死。

酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對分子質量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下，其腱性組織被水解成膠凍狀溶液，從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150 μL滴在薄膜上，可形成液滴狀膠原蛋白凝膠( ，其生物力學強度極差，一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進行SDS-PAGE，結果顯示：Ⅰ型膠原蛋白原液在相對分子質量130 000附近有明顯條帶，另一條帶的相對分子質量大于170 000(圖 2) 。膠原蛋白濃度為1.8 mg/mL。吸取礦化液倒入小培養(yǎng)皿中，將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6 d后，分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進行TEM和電子衍射觀察。用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。

一種海貍鼠尾膠原手術縫合線制備方法，其特征在于，步驟如下：(1)膠原紡絲液的配制：將備用的海貍鼠尾筋切成薄片，用無花果蛋白酶進行酶解處理，再用雙氧水溶液殺酶；將殺酶后的切片用蒸餾水沖洗，然后用乙酸溶液溶脹，把溶脹后的切片分散攪拌，然后用濾網過濾，除去雜質及不溶脹物，然后把該溶液離心脫泡制得膠原紡絲溶液；(2)手術縫合線纖維的成形：將膠原紡絲液裝入立式向上濕法紡絲機的紡絲液貯罐中，用氮氣擠壓入含有pH＝8-11、質量濃度為50-80％的硫酸鈉溶液的立式凝固浴中凝固成型，再經過質量濃度為60-90％的乙醇水溶液的脫水浴脫水，再經過假捻器加捻，合股后再進入含有pH＝9-11、質量濃度為0.8-1.2％戊二醛的交聯浴中交聯，經過水浴水洗，再經第二次加捻，除去水及交聯劑，干燥后，在卷繞輥上卷繞即得手術縫合線。鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立。開封鼠尾膠原銷售廠家

制備鼠尾膠原：取大鼠尾巴洗凈，75%酒精浸泡5分鐘。昆明鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原類似物的建立：目的：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞，制備鼠尾膠原，將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細胞溶液在適當的比例下混合后形成凝膠構建類似物。結果：形成的類似物中成纖維細胞生長狀態(tài)良好，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力。結論：①利用鼠尾膠原可以構建類似物，該模型是進行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復合皮的關鍵與基礎；②成纖維細胞膠原凝膠復合物有著良好的生物學特性，它是研究成纖維細胞與細胞外基質之間以及細胞之間相互作用的良好模型。昆明鼠尾膠原廠家

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