原代細胞的培養(yǎng)與建系細胞的來源多樣，培養(yǎng)方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織部位及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。原代細胞經(jīng)分散接種之手段稱為傳代。凡能經(jīng)傳代方式進行再次培養(yǎng)的細胞稱為傳代細胞。若能穩(wěn)定生長傳至10~20代以上的細胞可確立為細胞系。若有條件能開展單細胞克隆、純化，經(jīng)大量擴增后所形成的生物學特性穩(wěn)定的克隆化細胞群，稱之為細胞株或克隆細胞。此過程稱為細胞的純化或細胞克隆。這些基本技術(shù)是從事細胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ)，只有熟悉和掌握了基本技術(shù),才可能更快捷地學習和掌握其他方法,本章重點敘述常用的基本技術(shù)?？壳肮?jié)原代細胞的取材人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的首要條件，是進行細胞培養(yǎng)的靠前步，若取材不當，將會直接影響細胞的體外培養(yǎng)。如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小。廈門濟南原代細胞分離試劑盒

原代細胞培養(yǎng)實驗室常規(guī)步驟為：1）將動物組織從機體中取出并消毒除去存留在組織上的細菌、細菌、等污染源，這些污染源將會所需培養(yǎng)的原代細胞凋亡、停止生長和繁殖直至死亡，因此整個原代細胞培養(yǎng)過程中較全在無菌狀態(tài)下進行。2）將組織塊在選定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分鐘，通常在37C水浴里進行，而蛋白酶的選定取決于部位組織和所需細胞的類型，比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能解而出單個細胞，但是對于腦組織和乳腺等軟組織，就只能用分解能力較弱的膠原蛋白酶，以免損傷分散出來的單個細胞。廈門濟南原代細胞分離試劑盒原代細胞不僅普遍應用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎(chǔ)研究。

細胞凍存：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代細胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導致細胞死亡或損傷。與細胞系不同，原代細胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型，你應該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。正常的原代細胞培養(yǎng)，在無污染的情況下，建議培養(yǎng)基中不加抗體，抗體會影響細胞的某些基因變異從而導致實驗數(shù)據(jù)有差異，所以cellsystems的細胞在分離提取時就考慮到這點，他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時，通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞達到95%以上的純度，這樣得到的實驗數(shù)據(jù)更為準確~

原代細胞在生物醫(yī)藥領(lǐng)域有不可替代性作用，市場前景廣闊。原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和部位后立即進行培養(yǎng)。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數(shù)。但實際上，通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞如何傳代接種：原代細胞（primaryculturecell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅普遍應用于分子、細胞生物學和生物醫(yī)學基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學、基因組學、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學研究等，還可應用于當今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、藥物的研究等只用于某些特定的細菌如豬傳染性腸胃炎細菌的培養(yǎng)。

原代細胞轉(zhuǎn)染實驗要點：轉(zhuǎn)染過程不可添加物品，否則會導致細胞死亡；開始實驗siRNA的用量設置在終濃度10nM、30nM、50nM、100nM進行摸索，后續(xù)實驗根據(jù)實驗結(jié)果修改。RFectPM可用來轉(zhuǎn)染siRNA、antisenseRNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞。對于大多數(shù)原代細胞，RFectPM的細胞轉(zhuǎn)染陽性率都在80%以上，而轉(zhuǎn)染細胞死亡率不到10%。RFectPM的使用也極其簡便，先將sRNA與RFectPM室溫混合，再將siRNA-RFectPM混合物直接加入含培養(yǎng)基的細胞，血清對轉(zhuǎn)染效果沒有影響，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液。給培養(yǎng)液中加入低濃度的透明質(zhì)酸復合物。在有攪拌裝置的培養(yǎng)器皿內(nèi)加入培養(yǎng)液。鄭州正規(guī)原代細胞分離試劑盒廠家直銷

應該添加額外的組織特異性因子，以防止成纖維細胞的生長。廈門濟南原代細胞分離試劑盒

使用RFect系列小核酸轉(zhuǎn)染試劑做siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染測實驗注意事項：1.細胞接種：一般做轉(zhuǎn)染前現(xiàn)在接種/鋪板（細胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml），使做轉(zhuǎn)染前細胞密度在30-50%；如果細胞是原代細胞，接種密度可以密一些，細胞計數(shù)在2*10^6cell/ml；懸浮細胞可以在轉(zhuǎn)染當天接種/鋪板（細胞計數(shù)大約5*10^4cell/ml），待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后做轉(zhuǎn)染前細胞密度30-40%。2.為了能在使用時有較好的轉(zhuǎn)染效果，靠前次使用建議您用24孔板做，每孔2ul轉(zhuǎn)染試劑即可。將較佳轉(zhuǎn)染條件（siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的用量、比例）放大到對應的孔板即可廈門濟南原代細胞分離試劑盒