RNA提取關(guān)鍵點:RNA的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無數(shù)人頭疼的問題,較佳方法是保證樣品完全裂解,但相同的裂解方案換了一個樣本可能就沒轍了。為了提高裂解效果,可以將裂解緩沖液與機械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配,或者在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶K、溶菌酶等)。BIOG血液RNA快速提取試劑盒是公司研發(fā)團隊在綜合比較了國外同類較好產(chǎn)品的基礎(chǔ)上反復(fù)研制優(yōu)化而成,專門用于血液RNA的快速提取純化。本試劑盒采用獨特的裂解液配方,可直接從新鮮、冷凍或陳舊的全血中提取高質(zhì)量的RNA,操作簡便快速,只需15分鐘即可完成血液RNA提取。RNA提取得率較高,可在200μL全血中提取5μg左右RNA。BIOG血液RNA快速提取試劑盒采用了較新的較好離子膜,裂解液和洗脫液經(jīng)過多次優(yōu)化,有效地去除了蛋白、色素、脂類等雜質(zhì)污染,特別適用于血液包括細菌、病菌等傳染的分子檢測。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機相得到蛋白質(zhì)。太原正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦
常用總RNA提取試劑:異硫氰酸胍法和Trizol法是動物組織及動物細胞總RNA提取較常用的方法,異硫氰酸胍法操作簡單快捷,適用于樣本足夠大的常規(guī)動物組織;Trizol法裂解能力較強,尤其適合小樣本及特別難提取的組織,如兔子皮膚,動物結(jié)締組織等總RNA的提?。涣硗釺rizol作為一種通用型的裂解試劑,還可以用于植物組織、細菌、菌類等組織的提取。對于含多糖多酚的植物組織如油茶、茶葉、油菜等還可以使用CTAB法進行總RNA的提取。提取RNA時我們經(jīng)常遇到的問題是:(1)RNA產(chǎn)量較低;(2)RNA有嚴(yán)重的鹽類污染;(3)RNA有嚴(yán)重的有機溶劑污染;(4)樣品降解等問題。合肥正規(guī)RNA提取試劑廠家若比值較低,說明有殘余蛋白質(zhì)存在;比值太高,則提示RNA有降解。
RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時,使用Takara公司的樣品保護劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時也可以有效解決組織、細胞樣品的短時間保存及運輸問題。此外,如果將不同時期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達的時序變化,減少實驗組間的誤差
RNA提取試劑TRIpure是基于世界上使用較普遍的異硫氰酸胍/酚法研制而成的總RNA抽提試劑。在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性。無論是人、動物、植物還是細菌組織,該方法對少量的組織(50-100mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。TRIpure試劑操作上的簡單性允許同時處理多個樣品,所有的操作可以在一小時內(nèi)完成。TRIpure抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染,故而能夠作RNA印跡分析、斑點雜交、poly(A)+選擇、體外翻譯、RNA酶保護分析和分子克隆等。和進口品牌實驗對照顯示,公司的產(chǎn)品質(zhì)量已經(jīng)達到甚至超過了進口產(chǎn)品的質(zhì)量~細胞質(zhì)和細胞核RNA提取試劑盒特點:方便快捷的離心柱操作方式。
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡介。改進的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點:1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免了過度干燥不易溶解問題。3、獨有的RL裂解液配方,可以有效的消除基因組污染。4、多次漂洗去蛋白過程,提取RNA純度更高。5、有效的去除了無用的5S在總RNA中含量,提高了純度。RNA提取試劑注意事項:耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶。合肥正規(guī)RNA提取試劑廠家
RNA 的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無數(shù)人頭疼的問題。太原正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦
RNA提取醇沉淀不是越多就越好。有些實驗方案會推薦,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次。實際上,任何提取實驗,都會在純度和得率這一對矛盾中取舍。醇沉淀會將脂溶性雜質(zhì)去掉,但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會連同RNA一起被沉淀下來。因此,多整幾次,并不會讓RNA的純度翻倍,反而還會有降低得率的風(fēng)險。一般情況下,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可。但是,倘若預(yù)計RNA濃度很低,那就只能放棄純度,在低溫沉淀數(shù)小時,以換來較高的得率。圍繞DEPC的玄學(xué)。許多實驗方案會推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水,以滅活RNase。這一點是要肯定的。不過,在使用DEPC的過程中,又充斥著一些玄學(xué)。高壓滅菌后的DEPC水,會有一股“香甜”的味道。許多人會以為那是殘留的DEPC而不敢用。實際上,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類副產(chǎn)物。太原正規(guī)RNA提取試劑廠家推薦