細(xì)胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng)：1、凍存液比例一般是培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1或5:4:1；動(dòng)物種屬的原代細(xì)胞凍存液可采用的比例是培養(yǎng)基：血清：DMSO=0:9:1，即直接用血清重懸細(xì)胞再加入DMSO，盡管如此，原代細(xì)胞的復(fù)蘇成活率還是很低。2、有文獻(xiàn)表明，細(xì)胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙，因?yàn)檫@一速度可以很好的控制細(xì)胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生。我們實(shí)際操作不可能將速度控制的這么精確，目前慣用的就是4℃30min、-20℃1h30min、-80℃2h后轉(zhuǎn)入液氮中。無(wú)血清凍存液使用方法：將加有凍存液的細(xì)胞懸液分裝至凍存管中。廣州正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家推薦

無(wú)血清細(xì)胞凍存液，含多種保護(hù)劑成分。一些保護(hù)劑，易于穿透細(xì)胞，避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞，同時(shí)另一些保護(hù)劑不能穿透細(xì)胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結(jié)合細(xì)胞外的水分子，降低細(xì)胞外溶液的電解質(zhì)濃度，減少陽(yáng)離子進(jìn)入細(xì)胞的數(shù)量，為多種保護(hù)劑組合，在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù)，較大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。無(wú)血清細(xì)胞凍存液不含牛血清，無(wú)動(dòng)物源組份。2-8℃即可穩(wěn)定保存，無(wú)需冷凍，即取即用。凍存細(xì)胞，無(wú)需程序降溫。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。唐山正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家推薦程序降溫凍存技術(shù)要點(diǎn)是慢凍，標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2/℃ min。

細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：1、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存，但為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。在凍存前一日換一次培養(yǎng)液;2、將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí)，要做好防護(hù)工作，以免凍壞;3、凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。4、取細(xì)胞的過(guò)程中注意帶好防凍手套，護(hù)目鏡。此項(xiàng)特別重要，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮，解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致炸列。凍存液產(chǎn)品針對(duì)細(xì)胞凍存的特殊配方，能較大降低細(xì)胞在凍存過(guò)程中冰晶對(duì)于細(xì)胞的損傷，有效提高細(xì)胞復(fù)蘇率和活力。

細(xì)胞凍存：取出凍存管，注明細(xì)胞名稱，代數(shù)，日期。離心后，以無(wú)菌吸管吸棄上清，不要吸到底部的細(xì)胞沉淀。將細(xì)胞沉淀與凍存液充分混勻，根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果，將細(xì)胞總數(shù)調(diào)節(jié)成細(xì)胞數(shù)量為5-10*105/ml為宜。將細(xì)胞凍存懸液分裝進(jìn)細(xì)胞凍存管中，一般2ml的凍存管中裝入1-1.5ml凍存液為宜。嚴(yán)密封口后，使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1℃。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入異丙的醇凍存盒中，然后將凍存盒置于–80℃條件下過(guò)夜。若無(wú)凍存盒及其他凍存裝置，可以先將凍存管置于4℃30min，再-20℃凍存1h直至完全冷凍，再轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過(guò)夜。第二天將已經(jīng)冷凍的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮容器中，置于液氮上方的氣相空間中儲(chǔ)存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液，通用于人和各種動(dòng)物細(xì)胞株。

無(wú)血清細(xì)胞凍存液與傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液比較及優(yōu)勢(shì)：1.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液只適用于含血清細(xì)胞的凍存，但并不適用于無(wú)血清培養(yǎng)的細(xì)胞，例如一些CIK細(xì)胞等，而無(wú)血清細(xì)胞凍存液即適用于含血清細(xì)胞的凍存，又適用于無(wú)血清細(xì)胞的凍存，是一種通用型細(xì)胞凍存液，通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株；2.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液含10%胎牛血清，因血清是動(dòng)物源性成份，因此病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)很高，而無(wú)血清細(xì)胞凍存液因不含血清，只含DMSO、葡萄糖等營(yíng)養(yǎng)成份，較大降低了動(dòng)物血清來(lái)源病毒、霉菌和支原體等污染的風(fēng)險(xiǎn)，確保凍存細(xì)胞的安全；3.傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液含血清，但動(dòng)物血清成分復(fù)雜，個(gè)體差異大，且生產(chǎn)來(lái)源不穩(wěn)定，因此批次間質(zhì)量常常不穩(wěn)定，這導(dǎo)致培養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)也會(huì)受到影響，而無(wú)血清細(xì)胞凍存液成分和配比明確，批次間差異很小，能夠保證生長(zhǎng)細(xì)胞狀態(tài)的穩(wěn)定性，細(xì)胞存活率高。無(wú)血清細(xì)胞凍存液：為多種保護(hù)劑組合，在細(xì)胞內(nèi)外進(jìn)行雙重保護(hù)，較大提高了細(xì)胞復(fù)蘇存活率。昆明正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液哪家好

程序降溫法使用的凍存液主要配方為培養(yǎng)基、血清、DMSO。廣州正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家推薦

無(wú)血清細(xì)胞凍存液使用方法：選擇凍存處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。1）按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。2）按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù)。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3）取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min）。移去離心管中的上清液。4）加入適量的無(wú)血清型細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度為5×105至5×106cells/ml。緩慢地混合均勻，制成細(xì)胞混合液。5）將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示完全的冷凍保存管中。6）直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃以下冰箱，長(zhǎng)期冷凍保存。廣州正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液廠家推薦