馬尾藻是我國南海常見的大型經(jīng)濟(jì)褐藻,也是褐藻多糖的重要來源。褐藻多糖及其降解產(chǎn)物—褐藻寡糖,具有眾多生物活性,在農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。以采自海南瓊海海域的孤囊馬尾藻為研究對(duì)象,探究了一種有效提取褐藻多糖和酶解制備褐藻寡糖的方法,并對(duì)制備的褐藻多糖及寡糖進(jìn)行純化、結(jié)構(gòu)分析和活性評(píng)價(jià)。研究結(jié)果如下:采用超聲波輔助熱堿法,通過響應(yīng)面優(yōu)化獲得孤囊馬尾藻多糖的比較好提取工藝,在超聲功率500W、料液比1:25、提取時(shí)間5.95h、提取溫度82.27℃、NaOH質(zhì)量分?jǐn)?shù)3.87%的條件下粗多糖得率為41.23%±0.98%。采用TCA沉淀法除蛋白,粗多糖的蛋白去除率達(dá)到81.93%,多糖保留率92.17%;優(yōu)化了H2O2氧化法除色素工藝,在H2O2濃度1.5%、70℃條件下脫色6h時(shí),脫色率達(dá)到91.23%,多糖保留率為85.32%。采用DEAE-52離子交換層析柱對(duì)初步純化后的多糖進(jìn)一步分離純化,獲得SOP1、SOP2和SOP3三個(gè)多糖組分,并明確了它們的分子量、純度以及總糖、還原糖、蛋白、硫酸根和糖醛酸的含量。采用自主分離的產(chǎn)褐藻膠裂解酶類芽孢桿菌新種,發(fā)酵制備粗酶液,發(fā)酵液酶活為15.20U/ml。褐藻寡糖水溶性好，易于被吸收利用，也是重要的信號(hào)分子，能夠參與植物的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)抗病的過程。天津褐藻寡糖添加量

AOS促進(jìn)植物體內(nèi)胼胝質(zhì)的沉積對(duì)噴施AOS和ddH2O的擬南芥葉片進(jìn)行苯胺藍(lán)染色,結(jié)果顯示,AOS處理的葉片葉脈處有明顯的熒光現(xiàn)象,說明AOS可以促進(jìn)胼胝質(zhì)的積累,抵抗病原菌的入侵。AOS激發(fā)SA信號(hào)通路對(duì)AOS和ddH2O處理后的本氏煙葉片進(jìn)行液相色譜測(cè)定,結(jié)果顯示,AOS處理的葉片中SA的含量相對(duì)較高;接種PVX后,葉片中的SA的合成進(jìn)一步增加。同時(shí),利用qRT-PCR檢測(cè)了AOS處理后SA合成途徑中的兩個(gè)關(guān)鍵基因ICS和PAL的表達(dá)水平,結(jié)果表明ICS基因的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照,而PAL基因的表達(dá)水平與對(duì)照相比并無明顯差別,說明AOS主要通過ICS途徑誘導(dǎo)SA的合成。利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)SA信號(hào)通路中的標(biāo)志基因的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)NPR1、PR1a的表達(dá)水平明顯提高。上述結(jié)果說明,AOS可以促進(jìn)SA的積累,并激發(fā)SA信號(hào)通路。山東褐藻寡糖顆粒價(jià)格褐藻寡糖誘導(dǎo)植物體內(nèi)產(chǎn)生各種抗性物質(zhì)來緩解逆境因素對(duì)植物造成的損傷，從而達(dá)到抗逆的目的。

    美國復(fù)雜碳水化合物研究中心的主任Albersheim等提出了寡糖素這個(gè)概念，他認(rèn)為低濃度的寡糖是一種信號(hào)分子，可以與作物相互作用，對(duì)作物的生長(zhǎng)、發(fā)育和繁殖等起調(diào)控作用，抵Z病原微生物的侵染通過在調(diào)節(jié)過程中積累抗病物質(zhì)。褐藻寡糖是從植物和病菌中提取的低聚糖，對(duì)植物種子萌發(fā)、根系生長(zhǎng)和枝條伸長(zhǎng)有促進(jìn)作用，來源也非常普遍，開發(fā)應(yīng)用的潛在可能性大，可以改善現(xiàn)階段設(shè)施內(nèi)作物生產(chǎn)過程中化肥等的過度使用給人類和環(huán)境帶來的巨大危害。植物生長(zhǎng)表現(xiàn)為，植物細(xì)胞體積的增加、植物細(xì)胞分裂以及組織特性的發(fā)育過程。細(xì)胞分裂過程中的動(dòng)力和擴(kuò)張的分子機(jī)制主要依賴糖類等碳水化合物來提供能量。糖信號(hào)是決定植物生長(zhǎng)發(fā)育的中心，與其他信號(hào)網(wǎng)絡(luò)連接，控制細(xì)胞增殖和擴(kuò)張。植物的生長(zhǎng)發(fā)育還依賴于蛋白質(zhì)的合成，而糖和環(huán)境信號(hào)對(duì)mRNA翻譯的調(diào)控至關(guān)重要。

從植物生長(zhǎng)與抵抗逆境的特性出發(fā)，利用外源性寡糖對(duì)其進(jìn)行作用，通過檢測(cè)植物生長(zhǎng)指標(biāo)和抗逆指標(biāo)變化，來研究寡糖在植物促生長(zhǎng)與誘導(dǎo)抗逆過程中的作用機(jī)制。一方面對(duì)褐藻寡糖在植物促生長(zhǎng)與抗逆領(lǐng)域的作用機(jī)理進(jìn)行表征，另一方面，也希望能夠通過此研究獲得具有優(yōu)良生物功能活性的寡糖制劑，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)抗災(zāi)減災(zāi)做出貢獻(xiàn)。選擇三種來源（褐藻膠、果膠、殼聚糖）的不同分子量大小的九種寡糖片段進(jìn)行研究。利用植物的促生長(zhǎng)和抗逆指標(biāo)進(jìn)行篩選，獲得了一種既具有明顯的促生長(zhǎng)作用，又具有抗逆作用的寡糖片段，為褐藻寡糖HZ3，經(jīng)過質(zhì)譜分析，其組分是以二、三糖為主的含有少量四糖和五糖的寡糖混合物。第二部分是利用植物的植株、愈傷組織和懸浮細(xì)胞為材料，建立起寡糖促生長(zhǎng)的綜合性的驗(yàn)證方法。對(duì)植株分別選擇了雙子葉植物豌豆和單子葉植物玉米，利用寡糖浸種，分別考察在種子萌發(fā)與幼苗生長(zhǎng)初期其體內(nèi)蛋白酶、淀粉酶和激S含量的變化，結(jié)合種子與植株的生長(zhǎng)指標(biāo)，探討寡糖的促生長(zhǎng)作用機(jī)理。褐藻寡糖對(duì)植物的抗逆機(jī)制是通過誘導(dǎo)作用實(shí)現(xiàn)的。

探討褐藻寡糖作用機(jī)理, 將褐藻寡糖溶液均勻噴施到煙C葉面后置 于(4±1)℃下進(jìn)行低溫脅迫, 間隔不同時(shí)間檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)。 研究發(fā)現(xiàn), 濃度是影響褐藻寡糖抗凍性能的重要因素。 0 .05%, 0.20 %和 0.30 %褐藻寡糖具有誘導(dǎo)激發(fā)因子作用, 能夠誘導(dǎo)煙C CAT 、SOD 和 POD 活力提高, 去除體內(nèi)產(chǎn)生的氧 自由基, 保護(hù)細(xì)胞膜和葉綠素結(jié)構(gòu), 減少煙C葉片損傷, 提高煙C耐低溫能力, 其中以 0 .20 %褐藻寡糖誘導(dǎo)效果比較好; 0 .10%褐藻寡糖具有抗凍保護(hù)劑作用, 在 24 h 內(nèi)煙C各項(xiàng)指標(biāo)均沒有明顯變化, 可保護(hù)細(xì)胞免受低溫傷害, 但 48 h 時(shí)凍壞指標(biāo)增強(qiáng), 其保護(hù)作用減弱或者消失;高濃度 1 .00 %褐藻寡糖具有毒副作用, 在煙C細(xì)胞表面形成較強(qiáng)滲透勢(shì), 胞內(nèi)物 質(zhì)外滲嚴(yán)重, 煙C細(xì)胞結(jié)構(gòu)受到破壞, 加速低溫下煙C葉片損傷。 褐藻膠寡糖對(duì)植物來說也是一種重要的信號(hào)分子，能夠參與植物的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)抗病過程。河南褐藻寡糖吸收

褐藻膠寡糖（AOS）使毒死蜱對(duì)小麥幼苗的傷害有明顯緩解作用，增強(qiáng)植物對(duì)毒死蜱脅迫的抗性。天津褐藻寡糖添加量

    對(duì)初步純化的褐藻膠裂解酶進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)研究,酶的適反應(yīng)條件為50℃、pH8,在4～40℃、pH6～8范圍內(nèi)酶活力較穩(wěn)定;Ca2+、Mg2+和Fe2+等離子對(duì)該酶有促進(jìn)作用,EDTA、Ba2+、Zn2+等有抑制作用。通過優(yōu)化獲得褐藻膠的好酶解條件,在底物濃度、加酶量、體系、45℃條件下反應(yīng)32h時(shí),還原糖生成量為。以提取的褐藻多糖為原材料,按照此酶解工藝大量制備褐藻寡糖,通過Bio-GelP2凝膠色譜柱分離純化,得到不同聚合度的7個(gè)寡糖組分F1-F7,TLC分析結(jié)果顯示,其聚合度在1-7之間。去除自由基結(jié)果表明,褐藻多糖和寡糖都具有較強(qiáng)的抗氧化活性。自由基去除率隨著糖濃度的增加而增強(qiáng),在寡糖濃度、多糖濃度±±。多糖、寡糖濃度為±±。在相對(duì)濕度為85%和62%的環(huán)境下,褐藻多糖和褐藻寡糖都表現(xiàn)出較強(qiáng)的吸濕能力,褐藻寡糖更佳。在干燥環(huán)境下,褐藻多糖和寡糖都表現(xiàn)出很強(qiáng)的保濕效果,36h時(shí)褐藻寡糖的保濕率達(dá)到。抑菌結(jié)果顯示,褐藻寡糖對(duì)白色念珠菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌均具有較好的抑菌作用,褐藻多糖對(duì)白色念珠菌具有抑菌效果,對(duì)另3種細(xì)菌無抑制。 天津褐藻寡糖添加量

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