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廣州anti Flag免疫沉淀磁珠貨期

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2024-07-12

Co-IP的實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 細(xì)胞裂解：首先，細(xì)胞或組織被裂解，釋放其中的蛋白質(zhì)。
2. 抗體結(jié)合：然后，將特異性抗體（針對(duì)已知蛋白質(zhì)之一的抗體）加入到裂解物中。這些抗體會(huì)特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白（誘餌蛋白）上。
3. 免疫復(fù)合物形成：抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物。
4. 沉淀：接著，使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來(lái)捕獲免疫復(fù)合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結(jié)合，從而拉下抗體以及與之結(jié)合的目標(biāo)蛋白和任何相關(guān)的相互作用蛋白。
5. 洗滌：捕獲的免疫復(fù)合物被洗滌以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。
6. 洗脫和分析：免疫復(fù)合物被洗脫并進(jìn)行進(jìn)一步的分析，如Western blot（WB）或質(zhì)譜分析，以鑒定相互作用的蛋白質(zhì)。
免疫沉淀抗體的選擇？廣州anti Flag免疫沉淀磁珠貨期

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Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，其應(yīng)用場(chǎng)景如下：
1. 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的鑒定：Co-IP可用于構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，發(fā)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的結(jié)合伙伴。
2. 信號(hào)傳導(dǎo)途徑的研究：通過(guò)Co-IP技術(shù)，科學(xué)家們發(fā)現(xiàn)了許多關(guān)鍵的細(xì)胞信號(hào)通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等，為深入理解這些通路的功能和調(diào)控機(jī)制提供了重要線索。
3. 藥物靶點(diǎn)篩選：利用Co-IP技術(shù)，研究人員可以篩選潛在的藥物靶點(diǎn)。
疾病機(jī)制研究：通過(guò)分析疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的相互作用，Co-IP有助于揭示疾病的分子機(jī)制。
4. 抗體藥物開(kāi)發(fā)：Co-IP可用于研究抗體藥物與其靶標(biāo)蛋白的結(jié)合特性，評(píng)估抗體藥物的親和力和特異性。
5. 轉(zhuǎn)錄因子研究：Co-IP技術(shù)可以用于研究轉(zhuǎn)錄因子與蛋白質(zhì)的相互作用，進(jìn)而揭示基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
廣州anti Flag免疫沉淀磁珠貨期免疫沉淀技術(shù)ChIP的原理是什么？

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Co-IP（免疫共沉淀）技術(shù)主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，其實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)如下：
1. 樣品準(zhǔn)備：Co-IP實(shí)驗(yàn)通常有兩種，一種是內(nèi)源性蛋白相互作用驗(yàn)證，一種是非內(nèi)源性蛋白相互作用驗(yàn)證。內(nèi)源性相互作用通過(guò)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的方式將兩種蛋白轉(zhuǎn)染至同一細(xì)胞內(nèi)表達(dá)；非內(nèi)源性相互作用則是將含有靶蛋白的組織進(jìn)行預(yù)處理及細(xì)胞裂解獲得細(xì)胞裂解液。
2. 沉淀誘餌蛋白：利用磁珠偶聯(lián)抗體沉淀誘餌蛋白。在樣品中加入磁珠偶聯(lián)抗體，抗體會(huì)與誘餌蛋白結(jié)合，利用磁鐵將磁珠拉下，同時(shí)誘餌蛋白會(huì)一起被沉淀出來(lái)。
3. SDS-PAGE及WB檢測(cè)：得到沉淀后，需要驗(yàn)證沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE將蛋白復(fù)合物分離，隨后利用WB檢測(cè)是否存在靶蛋白。
4. 實(shí)驗(yàn)對(duì)照設(shè)置：為了避免“假陽(yáng)性”，需要設(shè)置正確的對(duì)照，包括陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照（Input組）。Input組為直接利用抗體對(duì)細(xì)胞裂解液進(jìn)行WB檢測(cè)，驗(yàn)證細(xì)胞裂解液中存在蛋白。
5. 結(jié)果真實(shí)性：確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白。使用單克隆抗體有助于避免污染的發(fā)生。

免疫沉淀Co-IP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡(jiǎn)而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。
免疫沉淀技術(shù)IP實(shí)驗(yàn)步驟。

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    免疫沉淀（immunoprecipitation）是指利用抗體可與抗原特異性結(jié)合的特性，將抗原（常為靶蛋白）從混合體系沉淀下來(lái)，初步分離靶蛋白的一種方法。免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）是一種在體外探測(cè)兩個(gè)蛋白分子間是否存在特異性相互作用的一種方法。其原理非常簡(jiǎn)單，如果兩個(gè)蛋白在體外體系能夠發(fā)生特異性相互作用的話，那么當(dāng)用一種蛋白的抗體進(jìn)行免疫沉淀時(shí)，另一個(gè)蛋白也會(huì)被同時(shí)沉淀下來(lái)。與酵母雙雜交技術(shù)不同，免疫共沉淀技術(shù)所利用的是抗原和抗體間的免疫反應(yīng)，是一種基于體外非細(xì)胞的環(huán)境中研究蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用的方法。 免疫沉淀技術(shù)ChIP實(shí)驗(yàn)步驟。杭州蛋白免疫沉淀技術(shù)服務(wù)

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瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu)  (直徑 50-150 μm)  可以結(jié)合抗體  (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒(méi)有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡(jiǎn)而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。
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標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀
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