蘇州RIP免疫沉淀磁珠的選擇

來源：發(fā)布時(shí)間：2024-06-25

免疫沉淀ChIP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。

瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu)，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸，具有更高的結(jié)合載量。

與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠，盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。

簡(jiǎn)而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。

免疫沉淀技術(shù)ChIP的原理是什么？蘇州RIP免疫沉淀磁珠的選擇

免疫沉淀（IP）實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵，因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。

1. 特異性：抗體應(yīng)當(dāng)對(duì)目標(biāo)蛋白具有高度的特異性，以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。

2. 親和力：抗體對(duì)目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高，以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。

3. 抗體類型：?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體都可以用于IP實(shí)驗(yàn)。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性，而多克隆抗體可能提供更強(qiáng)的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。

4. 應(yīng)用驗(yàn)證：選擇已經(jīng)過免疫沉淀（IP）或相關(guān)應(yīng)用（如Western blot, IHC）驗(yàn)證的抗體，這增加了實(shí)驗(yàn)成功的可能性。

5. 供應(yīng)商信息：選擇信譽(yù)良好的抗體供應(yīng)商，并查看供應(yīng)商提供的技術(shù)數(shù)據(jù)和客戶評(píng)價(jià)，以幫助做出決策。

anti Flag免疫沉淀磁珠價(jià)格免疫沉淀Co-IP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠？

免疫共沉淀分析（Co-IP）實(shí)驗(yàn)原理與IP十分類似，基本的技術(shù)都是采用目標(biāo)抗原特異性的固相化抗體；但I(xiàn)P的目標(biāo)是純化單一抗原，而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。

在Co-IP實(shí)驗(yàn)中，已知抗原稱為誘餌蛋白，與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號(hào)分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等，蛋白間相互作用強(qiáng)度范圍可能介于高度瞬時(shí)和十分穩(wěn)定之間。基本的Co-IP實(shí)驗(yàn)方案與IP相同，實(shí)際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是，還有許多其他因素需要考慮，例如，結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化，優(yōu)化時(shí)，需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強(qiáng)度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。

ChIP（染色質(zhì)免疫沉淀）實(shí)驗(yàn)是一種用于研究蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù)。以下是ChIP實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)方法概述：

1. 交聯(lián)：將細(xì)胞與交聯(lián)劑（如1%甲醛）孵育，通常在室溫下進(jìn)行10-15分鐘。

2. 終止交聯(lián)：添加甘氨酸以終止交聯(lián)反應(yīng)，孵育5分鐘。

3. 收集細(xì)胞：通過離心收集細(xì)胞，并用PBS洗滌以去除交聯(lián)劑。

4. 細(xì)胞裂解：使用裂解緩沖液裂解細(xì)胞，釋放染色質(zhì)。

5. 染色質(zhì)剪切：使用超聲波或酶消化將染色質(zhì)剪切成適當(dāng)大小的片段。

6. 免疫沉淀：將剪切后的染色質(zhì)與特異性抗體孵育，然后添加蛋白A/G磁珠。

7. 洗滌：用低鹽、高鹽和LiCl洗滌液洗滌磁珠，去除非特異性結(jié)合物。

8. 洗脫：用洗脫緩沖液洗脫DNA。

9. 逆轉(zhuǎn)交聯(lián)：用蛋白酶K處理，然后在65°C下加熱過夜以逆轉(zhuǎn)交聯(lián)。

10. DNA純化：使用商業(yè)試劑盒或標(biāo)準(zhǔn)酚/氯仿方法純化DNA。

11. 分析：使用qPCR分析富集的DNA，或進(jìn)行測(cè)序以確定蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)。

免疫沉淀技術(shù)RIP的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

ChIP實(shí)驗(yàn)的基本步驟包括：

1. 交聯(lián)（Crosslinking）：細(xì)胞被甲醛等交聯(lián)劑處理，使得蛋白質(zhì)和DNA之間的相互作用被固定，形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。

2. 細(xì)胞裂解：裂解細(xì)胞，釋放染色質(zhì)，同時(shí)保持蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的完整性。

3. 超聲或酶解：通過超聲或酶解將染色質(zhì)切割成較小的片段，以便于后續(xù)步驟中的免疫沉淀。

4. 免疫沉淀（Immunoprecipitation）：加入針對(duì)特定組蛋白修飾或轉(zhuǎn)錄因子的抗體，這些抗體會(huì)特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白質(zhì)上。

5. 捕獲復(fù)合物：使用蛋白A或蛋白G結(jié)合的珠子捕獲抗體-蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。

6. 洗滌：洗滌珠子以去除未特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)和DNA片段。

7. 逆轉(zhuǎn)錄交聯(lián)：將捕獲的復(fù)合物從珠子上洗脫，并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄交聯(lián)，使固定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物分離。

8. DNA純化：純化從免疫沉淀中得到的DNA片段。

9. 分析：通過qPCR、芯片分析（ChIP-chip）或高通量測(cè)序（ChIP-seq）等方法分析沉淀的DNA片段，以確定特定蛋白質(zhì)在基因組上的結(jié)合位點(diǎn)。

免疫沉淀技術(shù)IP的應(yīng)用有哪些？北京anti DYKDDDDK免疫沉淀磁珠原理

免疫沉淀的操作步驟？蘇州RIP免疫沉淀磁珠的選擇

免疫沉淀RIP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。

簡(jiǎn)而言之，瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng)，而磁珠在得率，可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。

蘇州RIP免疫沉淀磁珠的選擇

標(biāo)簽：免疫沉淀支原體

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