ChIP技術(shù)的應(yīng)用: 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的鑒定:研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布:分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況,這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究:結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究...
一步法快速支原體檢測的原理主要基于等溫擴(kuò)增技術(shù),這是一種在恒定溫度下進(jìn)行的核酸擴(kuò)增方法。以下是具體的步驟和原理: 1. 等溫擴(kuò)增技術(shù):一步法快速支原體檢測試劑盒利用LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplific...
細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體檢測的重要性體現(xiàn)在以下幾個方面: 1. 高污染發(fā)生率:支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率非常高,據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右。 3. 隱匿性強(qiáng):支原體污染具有很高的隱匿性,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業(yè)檢...
ChIP實(shí)驗(yàn)的基本步驟包括: 1. 交聯(lián)(Crosslinking):細(xì)胞被甲醛等交聯(lián)劑處理,使得蛋白質(zhì)和DNA之間的相互作用被固定,形成穩(wěn)定的蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。 2. 細(xì)胞裂解:裂解細(xì)胞,釋放染色質(zhì),同時保持蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的完整性。...
支原體檢測的應(yīng)用場景非常廣*,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域: 1. 細(xì)胞培養(yǎng):在實(shí)驗(yàn)室和生物制品工廠中,細(xì)胞培養(yǎng)過程容易受到支原體污染。支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞功能改變,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果和生物制品的質(zhì)量。因此,支原體檢測在細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量控制中至關(guān)重要。科研中...
Co-IP(Co-Immunoprecipitation,共免疫沉淀)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟: 1. 細(xì)胞培養(yǎng)與裂解:細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下生長到適當(dāng)?shù)拿芏取? 蛋白質(zhì)分離:裂解后的細(xì)胞混合物通過離心去除未破碎的細(xì)胞碎片和未裂解的細(xì)胞。收集上...
支原體污染的來源主要包括以下幾個方面: 1. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中可能存在支原體污染源,如空氣中的塵埃、其他培養(yǎng)物中的支原體污染等。 2. 實(shí)驗(yàn)操作人員的手部、衣物或皮膚表面可能攜帶支原體,造成細(xì)胞培養(yǎng)的污染。 3. 培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)材料如果受...
ChIP技術(shù)的應(yīng)用: 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的鑒定:研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布:分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況,這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究:結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究...
ChIP技術(shù)的應(yīng)用: 1. 轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的鑒定:研究特定轉(zhuǎn)錄因子在基因組上的結(jié)合模式。 2. 組蛋白修飾的分布:分析不同組蛋白修飾在基因組上的分布情況,這些修飾與基因的活躍或沉默有關(guān)。 3. DNA甲基化研究:結(jié)合ChIP技術(shù)可以研究...
免疫沉淀純化所得抗原量低有多種原因, A. 純化所得抗原量低 1. 抗原結(jié)合水平低 IP 應(yīng)用中出現(xiàn)低抗原結(jié)合水平的可能原因有很多,結(jié)合反應(yīng)所使用的溶液是重要原因之一。必須使用適合的緩沖液,有特定的pH和鹽濃度,可能還需要添加互作所需的輔...
qPCR法,即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Polymerase Chain Reaction)法,是一種高度靈敏和特異的分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測和定量DNA序列。在支原體檢測中,qPCR法的原理主要包括以下幾個步驟: 1. DNA提...
免疫沉淀技術(shù)(Immunoprecipitation, IP)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟: 1. 樣本準(zhǔn)備 2. 蛋白質(zhì)濃度測定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度。 3. 抗體預(yù)處理:如果使用預(yù)固定的...
檢測新鮮培養(yǎng)基是否有支原體污染,可以采用以下五種方案: 1. 培養(yǎng)法:這是一種傳統(tǒng)且可靠的方法,通過將培養(yǎng)基接種到適宜支原體生長的微生物培養(yǎng)基或瓊脂平板上,觀察是否有支原體生長。這種方法較為耗時,但成本較低。 2. 熒光染色法:使用特定的熒光染...
在科研中,支原體檢測是確保細(xì)胞培養(yǎng)純凈性的重要環(huán)節(jié)。以下是一些在科研中常見的支原體檢測方法: 1. 支原體培養(yǎng)法:這是一種傳統(tǒng)的檢測方法,通過將細(xì)胞培養(yǎng)物接種到特定的培養(yǎng)基中,觀察是否有支原體生長。這是直接的檢測方法,但耗時較長,通常需要數(shù)周時間。...
細(xì)胞培養(yǎng)中支原體檢測出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能由以下原因引起: 1. 擴(kuò)增產(chǎn)物污染:PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的大量DNA拷貝若未妥善處理,極微量的污染就可能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 2. 引物設(shè)計(jì)不當(dāng):引物設(shè)計(jì)不夠特異性,可能會與非目標(biāo)序列發(fā)生反應(yīng),導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。 ...
細(xì)胞培養(yǎng)中,支原體檢測的重要性體現(xiàn)在以下幾個方面: 1. 高污染發(fā)生率:支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率非常高,據(jù)估計(jì)平均發(fā)生率在60%左右。 3. 隱匿性強(qiáng):支原體污染具有很高的隱匿性,早期不容易被發(fā)現(xiàn),除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業(yè)檢...
LAMP法,即環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法(Loop-mediated isothermal amplification),在支原體檢測中的應(yīng)用具有以下特點(diǎn)和應(yīng)用場景: 1. 日常監(jiān)測:由于LAMP法的快速和簡便性,它適用于生物實(shí)驗(yàn)室的日常監(jiān)測,可以及時檢測出...
細(xì)胞培養(yǎng)中,需要去除支原體的污染:支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中 普遍的問題之一,細(xì)胞庫中或正在使用的細(xì)胞中,支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細(xì)胞的生理和代謝造成諸多影響: 01/ 爭奪營養(yǎng) – 阻礙細(xì)胞生長和增殖 02/ 改變蛋白質(zhì)、...
支原體去除的原理通常涉及以下幾個方面: 1. 抗*素作用:使用特定的抗*素制劑來抑制支原體的生長和繁殖。例如,含有喹諾酮類、四環(huán)素衍生物類和大環(huán)內(nèi)酯類抗*素的混合制劑,這些抗*素能夠抑制支原體的DNA和蛋白合成。 2. 破壞細(xì)胞膜:支原體去...
免疫沉淀技術(shù)(Immunoprecipitation, IP)是一種利用抗體與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的特性,從復(fù)雜樣本中分離和純化目標(biāo)蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法。這項(xiàng)技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用場景,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域: 1. 蛋白質(zhì)相互作用分析:通過免疫...
免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟: 1. 樣本準(zhǔn)備 2. 細(xì)胞裂解:使用裂解緩沖液(含有蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解)裂解細(xì)胞,釋放蛋白質(zhì)。 3. 蛋白質(zhì)濃度測定:使用BCA、Bradford或Lowry等方法測定裂解液中蛋白質(zhì)的濃...
Co-IP的實(shí)驗(yàn)步驟: 1. 細(xì)胞裂解:首先,細(xì)胞或組織被裂解,釋放其中的蛋白質(zhì)。 2. 抗體結(jié)合:然后,將特異性抗體(針對已知蛋白質(zhì)之一的抗體)加入到裂解物中。這些抗體會特異性地結(jié)合到目標(biāo)蛋白(誘餌蛋白)上。 3. 免疫復(fù)合物形成:抗體...
免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)通常包括以下幾個關(guān)鍵步驟: 1. 目標(biāo)蛋白質(zhì)的選擇: 2. 抗體的選擇:選擇特異性強(qiáng)、親和力高的抗體來捕獲目標(biāo)蛋白質(zhì) 3. 樣本的準(zhǔn)備:收集和準(zhǔn)備細(xì)胞或組織樣本。 4. 蛋白質(zhì)的裂解和釋放:選擇合適的裂解條件,...
免疫沉淀(IP)實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵,因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。 1. 特異性:抗體應(yīng)當(dāng)對目標(biāo)蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合,導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 2. 親和力:抗體對目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高,以...
Co-IP(Co-Immunoprecipitation,共免疫沉淀)的實(shí)驗(yàn)方法通常包括以下步驟: 1. 細(xì)胞培養(yǎng)與裂解:細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)條件下生長到適當(dāng)?shù)拿芏取? 蛋白質(zhì)分離:裂解后的細(xì)胞混合物通過離心去除未破碎的細(xì)胞碎片和未裂解的細(xì)胞。收集上...
免疫沉淀(immunoprecipitation)是指利用抗體可與抗原特異性結(jié)合的特性,將抗原(常為靶蛋白)從混合體系沉淀下來,初步分離靶蛋白的一種方法。免疫共沉淀(coimmunoprecipitation)是一種在體外探測兩個蛋白分子間是否存在...
免疫沉淀純化所得抗原量低有多種原因, A. 純化所得抗原量低 1. 抗原結(jié)合水平低 IP 應(yīng)用中出現(xiàn)低抗原結(jié)合水平的可能原因有很多,結(jié)合反應(yīng)所使用的溶液是重要原因之一。必須使用適合的緩沖液,有特定的pH和鹽濃度,可能還需要添加互作所需的輔...
免疫沉淀技術(shù)(Immunoprecipitation, IP)是一種利用抗體與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的特性,從復(fù)雜樣本中分離和純化目標(biāo)蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法。這項(xiàng)技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用場景,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域: 1. 蛋白質(zhì)相互作用分析:通過免疫...
RIP(RNA Immunoprecipitation,RNA免疫沉淀)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需要考慮多個方面,以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。 1. 目標(biāo)蛋白的選擇:確定你想要研究的目標(biāo)RNA結(jié)合蛋白(RBP)。 2. 陽性和陰性對照...
免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)通常包括以下幾個關(guān)鍵步驟: 1. 目標(biāo)蛋白質(zhì)的選擇: 2. 抗體的選擇:選擇特異性強(qiáng)、親和力高的抗體來捕獲目標(biāo)蛋白質(zhì) 3. 樣本的準(zhǔn)備:收集和準(zhǔn)備細(xì)胞或組織樣本。 4. 蛋白質(zhì)的裂解和釋放:選擇合適的裂解條件,...