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1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)...

外泌體項目獲批學(xué)科方向：從統(tǒng)計來看，與前年相似外泌體立項集中的領(lǐng)域還是一些病癥學(xué)，近年來外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成，耐藥性，檢測等方面有關(guān)。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer（IF=10.679）上的文章表明外泌體FMR1-AS1通過TLR7/NFκB/c-My信號通路在女性食管ai中促進(jìn)維持ai癥干細(xì)胞樣細(xì)胞的動態(tài)平衡。發(fā)表在JournalofExperimental&ClinicalCancerResearch（IF=5.646）上的一篇文章發(fā)現(xiàn)外泌體轉(zhuǎn)運p-STAT3可促進(jìn)結(jié)直腸ai細(xì)胞獲得性5-FU耐藥性。發(fā)表在Cancers(IF=6.162)上的...

外泌體的提取分離：1、PEG-base沉淀法。聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。2、試劑盒提取。近幾年來，市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。這些試劑盒不需要...

外泌體與肺病預(yù)后：外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復(fù)發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現(xiàn)，NY-ESO-1是其中對低生存率有顯著影響的標(biāo)志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統(tǒng)分析了28位NSCLC患者體內(nèi)的365種miRNA，其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表...

外泌體鑒定：外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物，多角度進(jìn)行鑒定。l透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形。l納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標(biāo)志物檢測：外泌體標(biāo)志蛋白包括四跨膜蛋白家族，如CD9、CD63和CD81；細(xì)胞質(zhì)蛋白，如肌動蛋白（Actin）和鈣磷脂結(jié)合蛋白（Annexins）；使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后離心除去細(xì)胞器，留取上清。...

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而細(xì)胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA外泌體提?。好庖叻蛛x外泌體的原理大多是...

人體幾乎所有類型的細(xì)胞都能分泌外泌體，外泌體普遍存在并分布于各種體液中，攜帶多種蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA和脂質(zhì)類物質(zhì)等，作為重要的傳遞信號分子，形成了一種全新的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng)，可參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、血管新生和一些病癥細(xì)胞生長等過程。外泌體與微泡：我們知道，細(xì)胞間相互作用可以通過釋放蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)等分子到胞外與受體結(jié)合從而介導(dǎo)胞內(nèi)細(xì)胞傳導(dǎo)。除此之外，細(xì)胞還可以釋放膜囊泡，外泌體與微泡就是其中兩種，二者相似但形成方式不同：外泌體是細(xì)胞內(nèi)內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中的膜囊泡，而微泡則是細(xì)胞出芽與細(xì)胞膜融合后直接脫落形成的囊泡，且外...

外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)...

外泌體的提取方法：1、色譜法。色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關(guān)系而對溶質(zhì)進(jìn)行分離的分析的方法。樣品中大分子不能進(jìn)入凝膠孔，只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱，首先被流動相洗脫出來；小分子可進(jìn)入凝膠中絕大部分孔洞，在柱中受到更強(qiáng)地滯留，更慢地被洗脫出。分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不普遍。2、超濾離心。由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法外泌體提?。撼x法因操作簡單，...

外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、一些病癥侵襲等方方面面。有研究表明一些病癥來源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了一些病癥的生長與侵襲。一些病癥。一些病癥轉(zhuǎn)移。來自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血?。ˋML）細(xì)胞的增殖、遷移和壓制細(xì)胞凋亡。治病靶標(biāo)。利用外泌體遞送小干擾RNA來沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞，以明顯降低RAS活化、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過程。免疫。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免...

1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)...

外泌體的提取、分離方法：梯度密度離心法。研究發(fā)現(xiàn)，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間，因此，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合，原理是先除去非囊泡物質(zhì)，再通過梯度密度濃縮提取外泌體，該方法可以得到相對較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h，但是2012年，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡，因此，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時間不充足，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層，特別是這個密度范圍又比較寬。外泌體的提取方法，先用含無外泌體血清的培養(yǎng)基對人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行饑餓培養(yǎng)。昆明...

1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對外泌體的研究興趣日益增長，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實現(xiàn)這項新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)...

外泌體的形成與鑒定：首先，細(xì)胞膜內(nèi)陷形成一個杯狀結(jié)構(gòu)，包括細(xì)胞表面蛋白和與細(xì)胞外環(huán)境相關(guān)的可溶性蛋白，導(dǎo)致早期胞內(nèi)體(early-sortingendosome，ESE)的從頭形成，或者是杯狀結(jié)構(gòu)直接和已經(jīng)存在的ESEs融合；trans-高爾基體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)也能協(xié)助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內(nèi)體(late-sortingendosomes，LSEs)，較終形成MVBs(也稱為多囊內(nèi)小體)。MVBs是通過endosome限制膜向內(nèi)凹(即質(zhì)膜雙凹)形成的，這一過程導(dǎo)致MVBs含有多個ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合，較終降解或與質(zhì)膜融合釋放作為外泌體的ILVs。外泌體表面蛋白包括四聚...

具體步驟是:以下所有步驟都在4℃下進(jìn)行，1、300×g10min，棄沉淀，去除細(xì)胞2、2000×g20min，棄沉淀，去除死細(xì)胞3、10,000×g30min，棄沉淀，去除細(xì)胞碎片等亞細(xì)胞成分4、10,000×g70min，棄上清，沉淀即為外泌體5、PBS（每10ml細(xì)胞培養(yǎng)液用30mlPBS重懸）清洗沉淀物，混勻，10,000×g70min6、lmlPBS溶解沉淀（外泌體），立即使用或置于-80℃?zhèn)溆谩?、一般超速離心法會結(jié)合密度梯度離心，這樣得到的外泌體更純，具體做法第4步后蔗糖梯度離心，10,000×g70min，以去除密度大于1.21g/ml的顆粒。優(yōu)點是：成本低，操作簡單，獲得的囊泡...

當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而啟動靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而啟動細(xì)胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。外泌體提取：可用于收集大于8...

外泌體作為近幾年來的研究熱點，受到了科研工作者的青睞及追捧。由于外泌體內(nèi)攜帶有大量的miRNA,少量lncRNA,Mrna以及DNA蛋白質(zhì)成為液體活檢的潛力無限的研究對相。所以，獲得純度高、內(nèi)容物完整的外泌體非常之重要，那么，外泌體的提取方法也顯得尤為重要。一、差速離心法差速離心法可以說是傳統(tǒng)普遍的外泌體提取方法。原理是：首先低速離心以除去細(xì)胞和細(xì)胞凋亡碎片；隨后，高速離心以去除大囊泡；高速離心以沉淀外泌體。蘇州君欣生物科技有限公司外泌體提純試劑盒的特色與優(yōu)勢：無需蛋白酶處理。外泌體提取試劑哪家好外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞...

外泌體的提取方法：1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。2、多聚物沉淀法。聚乙二醇（PEG）為常用的多聚物，可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)...

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時，對離心時間極為敏感外泌體提?。焊鶕?jù)外泌體的大小，從蛋白質(zhì)和其他大分...

當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而啟動靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而啟動細(xì)胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。外泌體的提取方法：超濾離心。...

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費時，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時，對離心時間極為敏感用無菌針管吸取上層含有外泌體的液體，置于80℃儲...

CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα，也稱為CD172a）的配體，CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號，從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進(jìn)胰腺病細(xì)胞增殖，增強(qiáng)胞飲作用從而促進(jìn)一些病癥細(xì)胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細(xì)胞有一定毒性作用，但使用外泌體能夠較小化對細(xì)胞的毒性。研究人員發(fā)現(xiàn)，CD47和病基因KRAS驅(qū)動的胞飲作用都會壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理，并增強(qiáng)胰腺病細(xì)胞對外泌體的特異性。所以，外泌體的這種特性增強(qiáng)了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力，并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實驗PDAC小鼠模型的總生存期。外泌體（Exosome）發(fā)現(xiàn)于1...

外泌體相關(guān)技術(shù)在過去幾年一直在快速發(fā)展，預(yù)計市場將大幅增長，因為它們可被應(yīng)用到液體活檢、精細(xì)醫(yī)學(xué)和再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。特別是，一些疾病衍生的外泌體通過調(diào)節(jié)血管生成、轉(zhuǎn)移和免疫來影響細(xì)胞的侵襲性，使其成為用于一些疾病檢測、診斷和治病選擇的極其有用的生物標(biāo)志物來源。在風(fēng)險投資方面，有很多市場活動。2016年1月，ExosomeDiagnostics公司在B輪融資中獲得6000萬美元資金，并于2017年7月獲得3000萬美元的C輪融資。同樣，CodiakBiosciences公司于2016年由MDAnderson一些疾病中心與兩家風(fēng)險投資公司共同成立，以8000多萬美元的A和B輪融資成立該公司。2017年...

由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)，另一方面也可以作為治病手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床治病。外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問題，獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關(guān)重要。據(jù)了解，目前人們多采用超速離心、免疫磁珠、超濾、沉淀或試劑盒等方法實現(xiàn)外泌體的提取分離。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì)，在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗一些病癥免疫等生理過程，與多種疾病的發(fā)生和進(jìn)程密切相關(guān)。這些試劑盒不需要特殊設(shè)備，隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代，提取效率和純化...

外泌體的提取的方式：1、免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實驗。2、PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。六是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不...

外泌體可通過流式、WB（檢測指標(biāo)有CD9,CD63,CD81）、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測，普遍應(yīng)用于藥物載體、疾病診斷marker、精細(xì)醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小，樣本含量低，提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲、商用試劑盒等。但到目前為止，仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量、純度以及生物活性。外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運輸和信息交流的重要工具，可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖，血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移。與細(xì)菌傳染，幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大，并與心血管疾病，老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超...

如果您正在或者準(zhǔn)備或者計劃開展外泌體研究，歡迎加入我們的外泌體小課堂。首先，來個自我介紹：(實物照)品牌背景FUJIFILMWako前身為和光純藥株式會社，企業(yè)，也是全球前列的試劑供應(yīng)商，在歐美都設(shè)有分公司。自成立以來一直致力于的試劑生產(chǎn)與開發(fā)，并獲得ISO9001、ISO/IEC17025、ISO14000等多項國際認(rèn)證。2017年被大佬FUJIFILMGroup（富士膠片集團(tuán)）斥收購（你沒看錯，就是做相機(jī)、膠卷的那個富士），更名為富士フイルム和光純薬株式會社（FUJIFILMWako）。外泌體提取試劑盒是FUJIFILMWako的明星產(chǎn)品哦，有關(guān)外泌體、如何成功獲取高質(zhì)量的外泌體等問題，請...

用于外泌體提取的體液收集注意事項：1、選擇血清還是血漿？推薦大多數(shù)研究選擇血漿。血液凝固過程中血小板會產(chǎn)生大量外泌體，含量占血清中外泌體的50%以上，選擇血漿可避免不必要的影響。2、注意抗凝劑的選擇。肝素類抗凝劑與PCR假陰性有關(guān)，這可能是因為肝素與引物和/或酶有競爭作用。除了克制PCR，肝素可以與外泌體結(jié)合，阻止細(xì)胞攝取外泌體。因此需要記錄肝素類藥物的患者的血液樣本。EDTA和雙嘧達(dá)莫（CTAD），CTAD可以阻止血小板的并克制其釋放外泌體。EDTA可能會干擾PCR反應(yīng)（盡管其程度小于肝素），但是還是優(yōu)于其他選擇。此外，有研究表明鈣螯合劑可在體外促進(jìn)外泌體與血小板的結(jié)合從而降低經(jīng)EDTA、或...

外泌體與免疫系統(tǒng)：不同的細(xì)胞來源的外泌體，包括免疫細(xì)胞(B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞)、病細(xì)胞、上皮細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞，釋放出帶有載體的外泌體，可影響先天免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)中受體細(xì)胞的增殖和各自的活性。CD4+和CD8+T細(xì)胞可直接或間接地受到外泌體的影響，刺激或壓制其增殖和功能。外泌體與代謝性和心血管疾?。和饷隗w可以通過攜帶miRNA或代謝物分子在代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生的發(fā)展過程中起作用。體外培養(yǎng)心血管疾病的細(xì)胞收集的外泌體與疾病相關(guān)的代謝適應(yīng)有關(guān)；體外培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞和胚胎干細(xì)胞的外泌體具有保護(hù)心血管的作用。這些發(fā)現(xiàn)表明不同來源的外泌體可以通過傳遞miRNA，蛋白等物質(zhì)改變受體細(xì)胞的代謝...

外泌體的提取方法學(xué)規(guī)范、統(tǒng)一定量及鑒定等。關(guān)于外泌體的提取有超速離心、試劑盒、超濾法、蔗糖密度梯度離心等，然而各種方法均有其利弊。超速離心法是目前外泌體相關(guān)文章中的主流方法，由于離心步驟繁瑣，費事費力，而且步驟多導(dǎo)致實驗中容易污染，且損耗量大，使得較終回收的外泌體不穩(wěn)定。而且對于抽提細(xì)胞上清來說，更是極為不請便，試想用提取300ml的上清需要6個50ml離心管，無論是過濾還是后續(xù)的每一步的離心去沉淀，都具有操作極其不便的缺點，總之非常麻煩。而超濾法存在外泌體會堵塞膜孔，造成濃縮效率低，濃縮管重復(fù)利用差，甚至堵塞在膜孔的外泌體還可能會粘連成團(tuán)，造成損失及較后的數(shù)據(jù)有誤差，對于后續(xù)實驗也有影響。外...