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細(xì)胞凍存秘籍：細(xì)胞凍存對于大多數(shù)動物細(xì)胞，通常每分鐘下降-1至-3℃。控制冷卻過程的較好方法是使用程序降溫系統(tǒng)。如果沒有程序降溫系統(tǒng)，可以使用程序降溫盒，然后將其置于-70℃至-90℃冰箱中過夜。雖然這種方法適用于許多細(xì)胞系，但不能提供可控的，均勻的或可重復(fù)的...

無血清細(xì)胞凍存液凍存細(xì)胞實(shí)驗步驟：選擇凍存處于對數(shù)生長期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率。1.按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。2.按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計算所需凍存細(xì)胞數(shù)。（參考：5×105至5×106cells/ml）。3.取相當(dāng)于...

密度過高會讓細(xì)胞沒有足夠的生存空間，密度過低會讓細(xì)胞無法互相連接健康生長。建議大家在細(xì)胞接種前，一定要調(diào)整好適合細(xì)胞生長的濃度，提高細(xì)胞的存活率。溫度控制不達(dá)標(biāo)慢凍快融是細(xì)胞凍存復(fù)蘇的關(guān)鍵詞之一。常規(guī)的凍存操作中，都會要求嚴(yán)格的梯度降溫，常見的是-4℃→-20...

細(xì)胞凍存液是如何保護(hù)細(xì)胞的：當(dāng)溫度進(jìn)一步下降，細(xì)胞內(nèi)外都結(jié)冰，產(chǎn)生冰晶損傷。但是如果在溶液中加入冷凍保護(hù)劑，則可保護(hù)細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。因為冷凍保護(hù)劑容易同溶液中的水分子結(jié)合，從而降低冰點(diǎn)，減少冰晶的形成，并且通過其摩爾濃度降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度...

系統(tǒng)和細(xì)胞外基質(zhì)之間的串?dāng)_：ECM是三維網(wǎng)狀，支持細(xì)胞，調(diào)節(jié)重要的細(xì)胞過程：增殖，粘附，遷移，細(xì)胞分化和炎癥。在對損傷的反應(yīng)中，**發(fā)生的事件包括系統(tǒng)的啟動和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)的上調(diào)。細(xì)胞對損傷信號的反應(yīng)進(jìn)程和較終結(jié)果在一定程度上受創(chuàng)床中存在的特定MM...

皮膚細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)成分：BM直接與干細(xì)胞接觸，由基底角質(zhì)形成細(xì)胞和真皮成纖維細(xì)胞共同合成。表皮BM的主要成分為纖維形成蛋白（IV型和VII型膠原、彈性蛋白）、糖蛋白（層粘連蛋白、纖維連蛋白）、蛋白聚糖（硫酸肝素、凝膠蛋白）。在真皮中，纖維形成膠原體（I型...

細(xì)胞外基質(zhì)的介紹：細(xì)胞外基質(zhì)(extracellularmatrix,ECM),是由動物細(xì)胞合成并分泌到胞外、分布在細(xì)胞表面或細(xì)胞之間的大分子，主要是一些多糖和蛋白，或蛋白聚糖。這些物質(zhì)構(gòu)成復(fù)雜的網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，支持并連接組織結(jié)構(gòu)、調(diào)節(jié)組織的發(fā)生和細(xì)胞的生理活動。細(xì)...

如何理解細(xì)胞外基質(zhì)影響細(xì)胞的粘附過程：1.決定細(xì)胞的形狀體外實(shí)驗證明,各種細(xì)胞脫離了細(xì)胞外基質(zhì)呈單個游離狀態(tài)時多呈球形.同一種細(xì)胞在不同的細(xì)胞外基質(zhì)上粘附時可表現(xiàn)出完全不同的形狀.上皮細(xì)胞粘附于基膜上才能顯現(xiàn)出其極性.細(xì)胞外基質(zhì)決定細(xì)胞的形狀這一作用是通過其受...

根據(jù)膠原的結(jié)構(gòu)和功能可將其分為：1.錨絲狀膠原（collagenofaachoringfilament）Ⅶ型膠原屬此組，其肽鏈三螺旋長達(dá)1530個氨基酸，中間穿插許多非膠原序列。兩條前膠原肽鏈的羧基端肽端-端重疊交聯(lián)形成二聚體，多個二聚體以羧基端交聯(lián)區(qū)為中心側(cè)...

自制染色干燥細(xì)胞外基質(zhì)膠：目的研究自制染色干燥細(xì)胞外基質(zhì)膠羊膜(extracellularmatrixamnioticmembrane,ECM-AM)的生物活性因子表達(dá)情況、生物力學(xué)特征以及在兔結(jié)膜修補(bǔ)術(shù)中的應(yīng)用效果。方法使用光鏡和HE染色對自制染色干燥ECM...

近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及一些病癥治病領(lǐng)域、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng)、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等。外泌體來源及內(nèi)含物。幾乎所有類型的細(xì)胞都可以分泌外泌體，同時外泌體也普遍存在于體液中，包括血液、眼淚、尿液、唾液、...

外泌體提?。?、過濾。超濾膜也可用于分離外泌體。根據(jù)外泌體的大小，從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。較常見的過濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體，也有設(shè)計成微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)以分離40...

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如...

實(shí)驗應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽...

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，此法不可取...

鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式,為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法。方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞,培養(yǎng)7天時進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),應(yīng)用高速攝像技...

細(xì)胞外基質(zhì)的作用：細(xì)胞外基質(zhì)不只具有連接、支持、保水、抗壓及保護(hù)等物理學(xué)作用，而且對細(xì)胞的基本生命活動發(fā)揮較全的生物學(xué)作用。影響細(xì)胞的存活、生長與死亡正常真核細(xì)胞，除成熟血細(xì)胞外，大多須粘附于特定的細(xì)胞外基質(zhì)上才能克制凋亡而存活，稱為定著依賴。例如，上皮細(xì)胞及...

細(xì)胞外基質(zhì)成分居然能調(diào)節(jié)葡萄糖代謝過程：鑒于錨定非依賴性生長對部位發(fā)生的重要性，已經(jīng)描述了基質(zhì)附著的分類變化及其代謝影響。透明質(zhì)酸（HA，或透明質(zhì)酸），一種普遍存在的ECM成分，是一種巨型醇胺糖胺聚糖，通過與其質(zhì)膜（PM）受體，CD44和HA介導(dǎo)的運(yùn)動受體（H...

細(xì)胞外基質(zhì)的主要類型及功能：細(xì)胞外基質(zhì)多細(xì)胞生物不光*由細(xì)胞組成，還包括分布于細(xì)胞外空間，由細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)和多糖所構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)————細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrik，ECM）。細(xì)胞外基質(zhì)在結(jié)締組織中較為豐富，占據(jù)了結(jié)締組織的大部分空間，...

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條...

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜...

CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα，也稱為CD172a）的配體，CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號，從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進(jìn)胰腺病細(xì)胞增殖，增強(qiáng)胞飲作用從而促進(jìn)一些病癥細(xì)胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細(xì)胞有一定毒性作用，但使用...

外泌體項目獲批學(xué)科方向：從統(tǒng)計來看，與前年相似外泌體立項集中的領(lǐng)域還是一些病癥學(xué)，近年來外泌體發(fā)表的文章也絕大部分與其在一些病癥的形成，耐藥性，檢測等方面有關(guān)。例如2019年發(fā)表在MolecularCancer（IF=10.679）上的文章表明外泌體FMR1-...

聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集細(xì)菌，現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合...

外泌體可通過流式、WB（檢測指標(biāo)有CD9,CD63,CD81）、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測，普遍應(yīng)用于藥物載體、疾病診斷marker、精細(xì)醫(yī)療、一些病癥治病等方面研究。由于外泌體直徑小，樣本含量低，提取十分困難。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾...

外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷：近年來眾多文獻(xiàn)報道，肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進(jìn)肺病的發(fā)生的發(fā)展，是早期診斷肺病的有效途徑。有研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%，...

如果您正在或者準(zhǔn)備或者計劃開展外泌體研究，歡迎加入我們的外泌體小課堂。首先，來個自我介紹：(實(shí)物照)品牌背景FUJIFILMWako前身為和光純藥株式會社，企業(yè)，也是全球前列的試劑供應(yīng)商，在歐美都設(shè)有分公司。自成立以來一直致力于的試劑生產(chǎn)與開發(fā)，并獲得ISO9...

外泌體在肺病進(jìn)程中的作用：肺病細(xì)胞來源外泌體（LCC-exosome）可以通過刺激一些病癥血管的形成來促進(jìn)一些病癥的生長。據(jù)相關(guān)報道稱，LCC-exosome中的miR-210可以通過調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3的含量，促進(jìn)一些病癥血管的生成；而LCC-e...

外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，可通過細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體，內(nèi)涵體與細(xì)胞膜融合后釋放其中的小囊泡。外泌體的直徑在40-110nm之間，其中包含RNA、蛋白質(zhì)、microRNA、DN**段等多種物質(zhì)，存在于血液、唾液、尿液、腦脊液和母乳等多種體...

外泌體與肺病預(yù)后：外泌體mirRNA和蛋白質(zhì)被認(rèn)為是NSCLC的預(yù)后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預(yù)后的生物標(biāo)志物時發(fā)現(xiàn)，外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外，還有研究表明，低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平mi...