緩沖溶液是許多生化反應、生產、實驗過程中的重要溶液,對穩(wěn)定溶液的酸堿度有重要的影響。本文以**常見的幾種緩沖體系——磷酸鹽緩沖溶液、硼酸鹽緩沖溶液、三羥甲基氨基甲烷(簡稱Tris)-HCl緩沖溶液、羥乙基哌嗪乙磺酸(供注射用)(簡稱HEPES)緩沖溶液為例,介紹緩沖溶液的組成、緩沖原理及其在生物化學方面的應用。HEPES緩沖溶液具有對細胞無毒性、不易穿過生物膜、不參與細胞內生化過程等特點,所以在生化實驗中具有***的應用,如可用于開放式細胞生長、細胞的長期觀察、RNA或DNA提取試劑盒中。其次,相關研究表明以HEPES溶液做緩沖液有利于多肽在金納米粒子表面的偶聯(lián)反應。另外,HEPES緩沖溶液對鎂生物降解影響的相關實驗表明,HEPES能提高鎂的生物降解性以及抑制鎂不溶鹽層的形成。AVT長期穩(wěn)定供應注射級海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保護劑與緩沖鹽。重慶備案登記號HEPES大批量采購
Tris-HCl緩沖液缺點:1、溫度效應大,如4℃時pH=8.4,37℃時pH=7.42、pH值受溶液濃度影響較大,稀釋十倍,pH值的變化大于0.1;3、對某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用,所以要使用與Tris溶液具有兼容性的電極。4、易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴密封。HEPES緩沖液HEPES是一種非離子兩性緩沖液,其在pH7.2~7.4范圍內具有較好的緩沖能力,常用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。HEPES緩沖液優(yōu)點:pKa值介于6.0和8.0之間;在水中具有高溶解度;具有膜不透性,不易穿透生物膜;對生化反應影響有限,可耐化學和酶解作用,且不與金屬離子生成復合物或沉淀;有極低的可見光和紫外光吸收;離子濃度、溶液組成和溫度對解離的影響小;HEPES緩沖液缺點:如果將HEPES水溶液暴露于環(huán)境光下三小時,會產生細胞毒性的H2O2;HEPES水溶液必須遠離光線以免影響實驗結果;而配置成溶劑后,要在4℃下保存,建議在短期內使用效果更佳;HEPES粉末放置的時候一般放于干燥的室內,不能直接長時間照射陽光。廣西藥用HEPES大批量采購國內艾偉拓注射用HEPES已登記。
關于HEPES緩沖溶液的配制,不同的文獻資料有不同的說法。根據用途,一種是單純的HEPES+NaOH,另一種是HEPES+鹽。各種配制方法總結如下:一、500ml1MHEPES,pH=7.0Stocksolution的配制119.15gHEPES溶解在400ml蒸餾水中,加0.5~1M的NaOH水溶液調節(jié)至少所需pH(HEPES的有效pH范圍是6.8~8.2),然后用蒸餾水定容至500ml,于4攝氏度保存。二、加少量鹽的HEPESBuffer配方(500ml)HEPES6.5g、NaCl8.0g、Na2HPO4.7H2O0.198g、用0.5MNaOH水溶液調節(jié)pH值,***定容。三、2×HEPES緩沖鹽溶液的配制將1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucanordextran)和1gHEPES溶解在90ml的蒸餾水,用0.5MNaOH調節(jié)至所需pH值,再用蒸餾水定容至100ml即可。
HEPES緩沖溶液的制備方法:一.500ml1MHEPES,pH=7.0Stocksolution的制備將19.15ghepes溶解在400ml蒸餾水中,加入0.5~1M的NaOH水溶液,調整至至少所需的pH(HePeS的有效ph范圍為6.8~8.2),然后用蒸餾水定容至500ml,在4保存。二.加入少量鹽的HEPESBuffer***(500ml)用HEPES6.5g、NaCl8.0g、Na2HPO4.7H2O0.198g、0.5MNaOH水溶液調節(jié)pH,*后定容。.2HEPES緩沖鹽溶液的制備將1.6gNaCl、0.074gKCl、0.027gNa2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucanordextran)和1gHEPES溶解在90ml蒸餾水中,用0.5MNaOH調節(jié)至所需的pH值,再用蒸餾水定容至100ml即可。艾偉拓注射用HEPES已登記?
注射級HEPES使用方法有兩種:(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中,再過濾除菌。每1000ml培養(yǎng)液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH調pH至7.2,濾過除菌后使用。此時HEPES的使用濃度為10mmol/L。(2)亦可配成100x貯存液(lmol/L),使用前取99ml培養(yǎng)液加入lml貯存液,**終應用濃度仍為10mmol/L。lmol/L(100x)HEPES貯存液配制方法:取23.8gHEPES溶于90ml雙蒸水中,用lNNaOH調pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,過濾除菌,分裝小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存。需要注意的是,HEPES緩沖液的使用終濃度為10-50mmol/L,對細胞無毒性作用。一般情況下,濃度為20mmol/L的HEPES即可達到緩沖能力?,F在市售HEPES為約10g包裝的小瓶,大家根據實際情況正確靈活配制就OK了艾偉拓穩(wěn)定供應注射級海藻糖、蔗糖、TRIS/TRIS-HCl、HEPES等生物保護劑與緩沖鹽!重慶備案登記號HEPES大批量采購
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