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上海DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

來源: 發(fā)布時間:2025-02-07

對于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細胞如人胚腎細胞(HEK293)和人宮頸*細胞(HeLa),脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對較高。這些細胞具有較強的內(nèi)吞能力,能夠有效地攝取脂質(zhì)體-核酸復合物。例如,在標準的轉(zhuǎn)染條件下,HEK293細胞的轉(zhuǎn)染效率可以達到50%-70%。而對于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細胞,如原代肝細胞和某些神經(jīng)細胞,其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因為它們的細胞膜結(jié)構(gòu)比較復雜,可能存在較厚的糖萼或者緊密的細胞間連接,阻礙了脂質(zhì)體-核酸復合物的進入。例如,原代肝細胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。

一般來說,貼壁細胞對脂質(zhì)體的耐受性相對較好。但是,在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下,即使是耐受性好的細胞也會受到影響。例如,HeLa細胞在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時,可能會出現(xiàn)細胞膜完整性受損,表現(xiàn)為細胞內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)釋放增加,細胞的代謝活動也會受到一定程度的干擾。對于難轉(zhuǎn)染的貼壁細胞,由于其本身比較脆弱,較低濃度的脂質(zhì)體也可能產(chǎn)生明顯的細胞毒性。比如原代神經(jīng)細胞,脂質(zhì)體可能會破壞其精細的神經(jīng)突起結(jié)構(gòu),影響細胞的正常生理功能。 是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體(CLs)表面結(jié)合,形成多層脂質(zhì)-核酸復合物而形成的。上海DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

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三、脂質(zhì)體組成對轉(zhuǎn)染效率的影響不同脂質(zhì)組成的影響:研究發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的組成對不同類型細胞的轉(zhuǎn)染效率有影響。例如,四種不同的DOTAP與DOPE重量比的脂質(zhì)體配方對不同細胞系的轉(zhuǎn)染效率不同。Huh7和AGS細胞的比較好脂質(zhì)體組成是T1P0和T3P1;COS7細胞是T3P1和T1P1;A549細胞是T1P1和T1P36。脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)的影響:脂質(zhì)體復合物的形狀會隨著DOPE比例的增加從層狀結(jié)構(gòu)變?yōu)榈沽切谓Y(jié)構(gòu),但在所有使用的細胞系中,特定結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)染效率上沒有明確的優(yōu)勢6。四、其他因素的影響血清的影響:對于某些細胞,血清的存在會影響轉(zhuǎn)染效率。如Siha細胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時轉(zhuǎn)染效率更高,而在Caco-2細胞的轉(zhuǎn)染中,血清在本實驗室條件下并不影響轉(zhuǎn)染效率19。細胞傳代次數(shù):Caco-2細胞在2-5次細胞傳代時轉(zhuǎn)染效率比較高9。綜上所述,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對不同類型細胞的影響存在多方面的差異,包括轉(zhuǎn)染效率、影響因素以及脂質(zhì)體組成等。在進行脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實驗時,需要根據(jù)不同的細胞類型優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,以獲得比較好的轉(zhuǎn)染效果。武漢轉(zhuǎn)染試劑現(xiàn)貨PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當鏈長超過20個殘基時,它與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。

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轉(zhuǎn)染時間對奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞轉(zhuǎn)染的影響:在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞中,應用帶有FAM標記的miRNA-185mimics為報告基因,檢測兩種不同轉(zhuǎn)染試劑(LipofectamineRNAiMAX與Lipofectamine2000)在細胞接種不同時間后的轉(zhuǎn)染效率33。結(jié)果顯示,無論使用哪種轉(zhuǎn)染試劑,12h的轉(zhuǎn)染效率均極***高于18、24h,LipofectamineRNAiMAX各時間點的轉(zhuǎn)染效率均極***高于Lipofectamine2000。并且,使用LipofectamineRNAiMAX作為轉(zhuǎn)染試劑時,12h的熒光強度也比較高。這說明在奶牛子宮內(nèi)膜原代上皮細胞中,選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑和轉(zhuǎn)染時間可以提高轉(zhuǎn)染效率。同時,該研究未明確轉(zhuǎn)染對細胞死亡的影響,但可以進一步研究不同轉(zhuǎn)染條件下細胞的存活率,以確定在提高轉(zhuǎn)染效率的同時降低細胞死亡的比較好條件。

    對基因表達的影響:在微小RNA-1180轉(zhuǎn)染對腎*細胞生長的影響的研究中,腎*細胞分為兩組:dsControl組和miR-1180組。實時定量(qRT)-PCR檢測p21mRNA的表達變化,結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR-1180后,786-O和ACHN細胞中p21mRNA水平分別上調(diào)(P〈)和(P〈),p21蛋白表達趨勢與qRT-PCR結(jié)果相符,CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表達明顯下調(diào)。同時,流式細胞術(FCM)檢測細胞周期變化顯示細胞周期被阻滯在G0/G1期,MTS結(jié)果顯示細胞活力明顯降低,集落形成實驗顯示細胞增殖能力降低。結(jié)論是miR-1180能******腎*細胞中p21蛋白的表達,并抑制腎*細胞786-O和ACHN的生長1。在微小RNA-330-5p過表達對宮頸*細胞C33A中腫瘤壞死因子受體相關因子4(TRAF4)基因表達的抑制作用和對C33A細胞增殖的影響的實驗中,通過Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑分別向?qū)m頸*細胞系C33A瞬時轉(zhuǎn)染miR-330-5p模擬物(設為實驗組)或者轉(zhuǎn)染miR-NC(設為對照組),結(jié)果顯示與對照組相比,實驗組C33A細胞中TRAF4mRNA下降(p<),TRAF4蛋白下降(p<)。集落形成實驗顯示,實驗組C33A細胞的增殖能力明顯下降(p<)。結(jié)論是miR-330-5p可通過降低宮頸*細胞C33A中TRAF4的表達抑制宮頸*細胞C33A的增殖。 小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率。

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動物視網(wǎng)膜成像技術為基礎研究提供了有力工具。從小鼠視網(wǎng)膜多種成像方式探討眼科光學成像技術進展:張鵬飛、張廷瑋、宋維業(yè)闡述了近年來在小鼠和人眼視網(wǎng)膜高精度光學成像領域出現(xiàn)的技術突破6。幾種在人眼視網(wǎng)膜成像中廣泛應用的光學成像技術在動物視網(wǎng)膜中得到了成功應用,實現(xiàn)了對動物視網(wǎng)膜的高精度細胞級別成像,為科研工作者提供了有力工具。同時,動物視網(wǎng)膜的研究工作也開發(fā)了一些新型成像技術或增強了對人眼視網(wǎng)膜功能機理的理解。綜上所述,動物成像技術在磁共振成像、熱成像、X射線發(fā)光成像、近紅外高光譜成像、非人靈長類動物超高場磁共振腦成像、新型動物搖籃的小動物多重成像、紅外成像以及動物視網(wǎng)膜成像等方面都取得了***的發(fā)展,為動物研究和相關領域的發(fā)展提供了重要的技術支持。轉(zhuǎn)染時推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基包括陽離子轉(zhuǎn)染試劑,如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。安徽轉(zhuǎn)染試劑便宜

化學轉(zhuǎn)染的效率可能取決于幾個因素,如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質(zhì),以及選擇的DNA與試劑比例。上海DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中的轉(zhuǎn)染機制存在多種差異。以下將詳細闡述不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細胞類型中轉(zhuǎn)染機制的差異表現(xiàn)。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑:機制概述:脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑通常由陽離子脂質(zhì)和中性脂質(zhì)組成,其轉(zhuǎn)染機制主要是通過與帶負電的RNA分子結(jié)合,形成脂質(zhì)體-RNA復合物。這個復合物能夠與細胞膜相互作用,通過內(nèi)吞作用或膜融合等方式進入細胞。進入細胞后,脂質(zhì)體-RNA復合物逐漸釋放RNA分子,使其能夠在細胞內(nèi)發(fā)揮作用。在不同細胞類型中的表現(xiàn):在腎*細胞系786-O和ACHN中,目前雖未明確提及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的作用,但可以推測其可能通過類似的機制進入細胞,影響細胞內(nèi)的基因表達和細胞生長。例如,微小RNA-1180(miR-1180)轉(zhuǎn)染對腎*細胞生長產(chǎn)生影響,雖然未明確指出轉(zhuǎn)染試劑類型,但脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可能在類似的研究中發(fā)揮作用1。在MEF細胞、3T3細胞、Hela細胞及MCF-7細胞中,MessageMax脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入細胞,并實現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細胞核中的定位。這表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑在不同類型的細胞中能夠有效地將RNA分子轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi),并實現(xiàn)特定蛋白的表達。上海DOTAP 轉(zhuǎn)染試劑

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