5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料，具有廣泛的應(yīng)用，作為抗體和其他探針標(biāo)記，用熒光顯微鏡，流式細胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實驗。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性，是流式細胞儀和免疫熒光中生物檢測**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)（特別是抗體）的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物，以及一系列具有針對細胞標(biāo)記和檢測優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠色光。高分子熒光染料細胞膜

PI是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。盡管PI不能通過活細胞膜，但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色。PI經(jīng)常被用來與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為535nm和615nm。2.染色過程（1）將1/10培養(yǎng)基體積的PI染色液加入到細胞培養(yǎng)基中（也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養(yǎng)基）。（2）在37℃培養(yǎng)細胞10～20分鐘。（3）用PBS或合適的緩沖液洗滌細胞兩次。（4）用535nm激發(fā)波長，615nm發(fā)射波長的濾光器的熒光顯微鏡觀察細胞。儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項：PI對人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護。南京熒光染料Cy7DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細胞膜染料，它們是一族親脂性的熒光染料，用于細胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。

與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機染料。熒光素的比較大吸收波長為494nm，比較大發(fā)射波長為521nm（通常吸收藍色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光），熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測到它，并且在與抗體結(jié)合時用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣，熒光素價格低廉且易于使用，使其成為生物學(xué)研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同，熒光素在水溶液中是無毒的。因此，它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。

異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）：FITC是應(yīng)用*為***的一種熒光素，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光，*大發(fā)射波長為525nm。FITC的熒光強度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時需格外注意溶液的酸堿度。a)電泳分離后的蛋白質(zhì)檢測(b)蛋白質(zhì)和肽的微測序分析(c)使用毛細管區(qū)帶電泳進行分子分析(d)生物相互作用中的分子跟蹤和檢測(e)細胞和組織切片中的抗原檢測(f)通過標(biāo)記DNA片段進行細胞凋亡檢測除了因其在水中的溶解性而易于用于偶聯(lián)物制備外，異硫氰酸熒光素還具有明亮的熒光（由于偶聯(lián)后的大消光系數(shù)和高量子產(chǎn)率），使其成為許多工藝的優(yōu)先染料。在流式細胞術(shù)和免疫熒光顯微術(shù)中，染料與各種抗體（一抗或二抗）結(jié)合，以檢查和研究IL-17免疫缺陷和CD63在腎功能中的作用等狀態(tài)。作為熒光素的衍生物，異硫氰酸熒光素含有一個異硫氰酸酯反應(yīng)基團，這有助于其對通常存在于生物分子中的動漫和巰基基團具有反應(yīng)性。Cy5.5含有一個游離胺基,可與多種官能團共軛,包括NHS酯和環(huán)氧化合物。

羅丹明123一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑。羅丹明123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體內(nèi)聚集，并發(fā)出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位，也常用于細胞凋亡檢測。由于細胞內(nèi)ATP的量與羅丹明123的熒光強度之間有相關(guān)性，此熒光染料被應(yīng)用于檢測細胞內(nèi)的ATP。羅丹明123的比較大激發(fā)波長為507nm，比較大發(fā)射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現(xiàn)黃綠色熒光。

一：工作液配制用緩沖液或者預(yù)熱的培養(yǎng)液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據(jù)自身實驗體系進行調(diào)整?！咀⒁狻浚簩τ诩毎麑嶒?，要控制好總體稀釋倍數(shù)，DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不能超過0.1%，以避免DMSO對細胞的影響。

二：熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準(zhǔn)備細胞。細胞數(shù)目應(yīng)為5×104～5×105個/mL。2、在載玻片上孵育細胞，用PBS或HBSS洗滌細胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時。4、去除Rhodamine123溶液并用培養(yǎng)液洗滌細胞（洗滌細胞后如果要固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20min，接著用PBS洗滌）。5、熒光顯微鏡觀察細胞。 Super Flour 系列在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。上海武漢熒光染料

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類親脂性熒光染料家族，用于標(biāo)記細胞膜和疏水性組織。高分子熒光染料細胞膜

小動物***成像技術(shù)（invivoimagingtechnology）是利用高靈敏度的光學(xué)檢測儀器直接檢測動物***體內(nèi)的細胞活動和基因行為研究的一類技術(shù)，是近年來發(fā)展**快的生命科學(xué)研究方法，是**直接觀察細胞和分子在體內(nèi)行為的新興技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究的各個領(lǐng)域[1]。***動物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在***內(nèi)表達產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。而熒光發(fā)光成像技術(shù)是將熒光物質(zhì)或熒光物質(zhì)標(biāo)記的小分子物質(zhì)如基因、細胞也可是小分子藥物、抗體、納米材料等導(dǎo)入到***體內(nèi)，通過小動物***成像系統(tǒng)的激發(fā)光源激發(fā)熒光集團到達高能量狀態(tài)，而后產(chǎn)生波長較激發(fā)光長的發(fā)射光，然后通過高靈敏度制冷CCD鏡頭探測到***內(nèi)的發(fā)射光。通過***成像技術(shù)可以觀測***動物體內(nèi)**的生長和轉(zhuǎn)移、炎癥的發(fā)生、特定基因的表達和藥物作用效果等生物學(xué)過程。高分子熒光染料細胞膜