納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸，納米粒子通常用于不同類型的細胞和組織的熒光成像。當今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點、貴金屬納米顆粒、聚合物點、量子點和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中，與其他分子熒光團和探針相比，納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢，使其成為理想的選擇。除了提高亮度外，納米粒子是惰性的并且往往分布均勻，這有助于在成像過程中獲得更好的結果。此外，與各種分子熒光團相比，納米顆粒和納米材料沒有細胞毒性，并且不受非特異性結合問題的影響。由于這些特性，大多數(shù)熒光納米顆粒（染色納米顆粒）可以內(nèi)化到細胞/組織中，并容易靶向給定部位。目前常用標記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。外泌體熒光染料發(fā)射

Cy7DiC18（DiR）是一個親脂性、近紅外熒光花青染料。這個染料常用于標記細胞質(zhì)膜。Cy7DiC18（DiR）的兩個18-碳鏈插入到細胞膜，從而進行特定的、穩(wěn)定的細胞染色，幾乎不會發(fā)生細胞間的染料轉移。Cy7DiC18（DiR）（近紅外熒光）和其他細胞膜熒光染料如DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）配合使用，為多色成像和流式細胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18（DiR）染色后可進行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他試劑）的固定，但不建議在染色后進行透化的過程。此外，在固定透化（室溫下用0.1%TritonX-100透化）后，也可以很好地進行質(zhì)膜染色。

1、Cy7DiC18（DiR）染色固定的細胞或組織樣品時，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當?shù)墓潭ㄒ簳е聼晒獗尘拜^高。

2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 熒光素鉀鹽熒光染料Alexa fluor異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術中。

第二種***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化學公司HoechstAG生產(chǎn)。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是鄰苯二甲酰亞胺，具有向A-T富集區(qū)插入的趨勢，因此后者不常使用。與DAPI相似，此類染料受到紫外線激發(fā)并在455nm下發(fā)射比較大值，在無結合狀態(tài)下變?yōu)?10–540nm。Hoechst染料還具有細胞滲透作用，因此可用于固定細胞和活細胞。與DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色劑碘化丙啶無法透過細胞膜。在細胞培養(yǎng)中，因為該染色劑無法進入完好的細胞內(nèi)，所以常常被用來區(qū)分活細胞和死細胞。碘化丙啶也是一種結合劑，但對不同的堿基沒有特異性。在核酸結合態(tài)下，其比較大激發(fā)波長為538nm，比較高發(fā)射波長為617nm。未結合狀態(tài)下碘化丙啶的比較大激發(fā)和發(fā)射被移到較短的波長和較弱的強度。它也可以在不改變其熒光特性的情況下與RNA結合。要區(qū)分DNA和RNA，必須使用足夠的聚合酶。

一、體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基圖像分析前，向細胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對細胞進行短時間孵育可增強信號。南京星葉生物熒光染料標記蛋白。

在1990年代***使用的綠色熒光蛋白（從水母維多利亞水母克?。┘捌溲苌铮ɡ缭寮t藍蛋白、藻膽蛋白和藻紅蛋白等）是當今生物學研究中**常用的一些生物熒光團。雖然熒光團可用于在細胞、細菌和各種***中表達質(zhì)粒，但它們的使用有一些缺點，即它可能很耗時，并且在融合時還能夠改變某些細胞蛋白的正常生物學功能。此外，與許多其他熒光團相比，生物熒光團的光穩(wěn)定性和靈敏度較低。綠色熒光蛋白(GFP)綠色熒光蛋白是當下流行的生物熒光團之一，由238個氨基酸組成，其中三個負責發(fā)出可見綠色熒光的結構。在水母本身中，熒光團與水母發(fā)光蛋白（一種蛋白質(zhì)）相互作用，當添加鈣時會發(fā)出藍光。通過DNA重組，研究人員可以使用負責產(chǎn)生蛋白質(zhì)的基因來研究給定的基因和蛋白質(zhì)。在這里，在將復合物插入細胞之前，該基因與另一個基因（負責產(chǎn)生所需蛋白質(zhì)的第二個基因）結合。如果細胞產(chǎn)生綠色熒光，研究人員就可以明顯看出該細胞能夠表達目標基因。GFP由488nm激光線激發(fā)，可在510nm處檢測。來自熒光團的微弱信號可以使用抗GFP抗體放大。作為生物標記物，綠色熒光蛋白用于以下功能：監(jiān)測各種生理過程*識別蛋白質(zhì)定位*檢測轉基因表達非磺化花青類染料- 該組中的一些染料包括 cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7 和 cy7.5。熒光素鉀鹽熒光染料Alexa fluor

Super Flour 系列在生物熒光領域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。外泌體熒光染料發(fā)射

其他細胞結構常用染料生物染料在細胞結構和組分鑒定中有著廣泛的應用，除細胞膜研究外，我們經(jīng)常也會對一些其它細胞結構及成分進行探索，例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細胞核等，而對于不同的細胞結構有不同的染料進行染色細胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液（DAPIStainingSolution）常用于細胞核染色，可將細胞核染成藍色。鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是細胞骨架的染色神器，羅丹明標記的Phalloidin（TRITC-Phalloidin）可將細胞染成橙紅色，DAPI與Phalloidin染色液是研究細胞形態(tài)變化時經(jīng)常用到的兩種共染的試劑，染色效果可見A1-E1用TRITC-鬼筆環(huán)肽（橙紅）染色的細胞骨架免疫熒光圖；A2-E2用DAPI（藍色）染色的細胞核免疫熒光圖；A3-E3合并的L929細胞免疫熒光染色圖。是S100A16過表達或下調(diào)前后PDAC細胞形態(tài)的變化。外泌體熒光染料發(fā)射