電鏡診斷法,采用電子顯微鏡,可以直接觀察病原顆粒的大小、形態(tài)和結(jié)構(gòu)。自1977-1978年間電鏡與超薄切片技術(shù)在柑橘黃龍病病樹葉片的篩管細(xì)胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)病原BLO以來,在中國,電鏡便成為診斷黃龍病的一個重要手段。采用癥狀明顯、老熟的葉片為材料,用側(cè)脈代替中代替中脈和縱切代替橫切韌皮部制樣等改進(jìn)方法,可有效地提高電鏡對BLO的檢出率。FBA染色液是有百分之一堿性品紅水溶液和百分之一無水對氨基本磺酸溶液按1:1的比例混合,再稀釋一定的倍數(shù)成為染色工作液。取染病的葉片用自來水和蒸餾水洗凈,用徒手切片法橫切,切片移至滴有FBA染色工作液的載玻片上染色5-8min,在光學(xué)顯微鏡下可觀察到其外向韌皮部篩管細(xì)胞中存在被染成紅褐色的病原細(xì)菌,多為桿狀,有些呈長橢圓形。但是這種檢測方法的穩(wěn)定性不好,對選取材料和切片的厚度要求都很高。病樹處理欠科學(xué),忽視砍前、砍后工作,并沒有真正做到去除病原。柳州皇帝柑黃龍病辨別
發(fā)病規(guī)律:黃龍病的病源是類菌原體,主要通過苗木調(diào)運和帶病接穗進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播,使無病的橘園成為病區(qū)。柑桔園內(nèi)主要通過木虱和其它傳病昆蟲(如橘蚜)進(jìn)行傳播。其發(fā)病率和病情輕重與許多因素有關(guān):柑桔園內(nèi)病樹多、木虱量大時,黃龍病的發(fā)生量就大;幼樹易感病,中成年樹較耐病;樹勢強(qiáng)的抗病力強(qiáng),樹勢弱的易感病;春梢發(fā)病輕,夏秋梢發(fā)病重;柑、橘、橙、柚類都可感病,但柑桔等耐病力弱、感病后衰退快,而柚類、橙類耐病力較強(qiáng)。桂林紐荷爾黃龍病辨別木虱能傳菌有兩個必要條件,其一,木虱需要帶菌;其二,木虱傳毒是需要一定時間的。
柑橘黃龍病又稱為“桔病”。由一種稱為韌皮部桿菌引起的細(xì)菌病害,通過嫁接苗木和一種稱為柑橘木虱的昆蟲進(jìn)行傳播,對柑橘造成的危害極大。黃龍病的防控技術(shù),1.加強(qiáng)植物檢疫,嚴(yán)禁帶病苗木和接穗的引入傳播。2.建立無病苗圃,培育無病苗木,一律采用無病苗種植。3.及時挖除發(fā)病樹。對每年春、秋兩個梢期,尤其是秋梢期,一旦發(fā)現(xiàn)病株或可疑病株,立即挖除集中燒毀。挖除病株前應(yīng)對病樹及附近植株噴灑有機(jī)磷藥劑,以防柑橘木虱從病樹向周圍轉(zhuǎn)移傳播。發(fā)病輕的柑橘園,挖除病株后可用無病苗補(bǔ)植。
PCR鑒定,自Villechanoux等發(fā)表發(fā)柑橘黃龍病病原的部分DNA序列以來,PCR檢測黃龍病的技術(shù)得到了有效發(fā)展。常用的PCR技術(shù)有常規(guī)PCR、定量PCR和巢氏PCR(nested-PCR)三種。1.常規(guī)PCR技術(shù)Jagoueix、hocquellet等采用常規(guī)PCR技術(shù)分別對黃龍病亞洲種和非洲種進(jìn)行了檢測,發(fā)現(xiàn)常規(guī)PCR技術(shù)比較好的區(qū)分兩種病原。丁芳等(2004)利用常規(guī)PCR技術(shù)檢測了田間和廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所幾個感黃龍病品種,發(fā)現(xiàn)其可以檢測出未顯癥狀的黃龍病的材料。2.定量PCR是指PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。定量PCR技術(shù)不僅可以檢測到黃龍病病原,同時可以檢測出病原含量多少。田亞南等(1996)報道,運用定量PCR檢測技術(shù),在木虱體內(nèi)病原含量多,其次為長春花,而柑橘中病原體相對少。均勻黃化病樹多枝新稍葉片不轉(zhuǎn)綠而呈現(xiàn)均勻黃化,出現(xiàn)在出發(fā)病樹和夏秋稍上,呈現(xiàn)均勻的淡黃綠色、易脫落。
病害流行條件苗木帶病率、田間病株率及介體木虱的種群數(shù)量是黃龍病發(fā)生流行的主要因素。黃龍病的發(fā)生流行與氣象條件有比較重要關(guān)系。栽培管理和植物保護(hù)措施是影響黃龍病發(fā)生的重要因素。良好的生態(tài)條件有利阻止病害蔓延。緯度與海拔:高緯度地區(qū)發(fā)生很少即使發(fā)病后損失也比較小,蔓延慢。不同種類和品種的柑橘樹抗病或耐病性有差異。癥狀鑒別癥狀鑒別是比較簡便的,也是比較直接的一種診斷方法??赏ㄟ^黃龍病發(fā)病癥狀觀察進(jìn)行初步診斷。黃龍病真的沒辦法治嗎?桂林紐荷爾黃龍病辨別
龍病癥狀的花是怎樣的?柳州皇帝柑黃龍病辨別
黃龍病的鑒別方法,研究認(rèn)為,“紅鼻子果”和斑駁黃化葉片是相當(dāng)有有特征的癥狀,可作為形態(tài)學(xué)鑒定柑橘黃龍病的主要依據(jù)。指示植物法,是利用病原在其他植物上表現(xiàn)癥狀的特征,作為鑒別病毒種類的標(biāo)準(zhǔn),這種用來產(chǎn)生癥狀的寄主稱為指示植物,又稱鑒別寄主。指示植物分為2種類型;一種在接種后產(chǎn)生系統(tǒng)的癥狀,并擴(kuò)展到未接種部位;另一種只在接種部位產(chǎn)生局部病斑。Bove和柯沖分別把柑橘青果病原BLO和柑橘黃龍病原BLO用菟絲子傳到長春花上。發(fā)病大長春花往往是個別枝條先發(fā)病,然后其他枝條才陸續(xù)發(fā)病,發(fā)病枝條葉片起初局部黃化,然后沿葉邊緣變黃,中脈附近葉肉成綠色,花變小。這樣可證明草地菟絲子所傳遞的就是柑橘黃龍病的病原BLO,所以可以用菟絲子和長春花檢測柑橘黃龍病。這種方法簡便易行,成本低,結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。但所需時間長,大量樣品的檢測比較困難。柳州皇帝柑黃龍病辨別
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