Exosome（外泌體）是由活細胞分泌小囊泡，具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)；參與細胞之間的交流，物質(zhì)的運輸以及正常生理過程的維持，此外還與疾病的產(chǎn)生有關(guān)。對分離的外泌體進行體外標記或示蹤，有助于對外泌體的功能進行進一步的研究。目前對于外泌體的標記方法有很多種，包括親脂性的染料和膜滲透型的化合物等。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長的半衰期，標記在兔紅細胞上的PKH26半衰期長達100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長期的體內(nèi)細胞跟蹤研究。外泌體被包裹在堅硬的雙層膜中，雙層膜保護外泌體的內(nèi)容物，使外泌體能夠在組織中長距離移動。外泌體的沉淀

外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進入受體細胞后仍具有翻譯蛋白質(zhì)、促進病毒感ran等功能。據(jù)估計，單個外泌體含有約≤100拷貝數(shù)的蛋白質(zhì)和≤10000拷貝數(shù)的核苷酸。不同細胞來源的外泌體中既包含與細胞形成、結(jié)構(gòu)和物質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)的共有成分，也包含與來源細胞的生物功能相關(guān)的特異分子。如B淋巴細胞、樹突狀細胞、肥大細胞和腸上皮細胞來源的外泌體含有大量的主要組織相容性復(fù)合體蛋白質(zhì)MHCclassⅡ和MHCclassⅠ，血小板和T細胞來源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質(zhì)，而ai細胞來源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質(zhì)分子。這類特異分子在外泌體介導(dǎo)細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、參與生理病理過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用。外泌體原液外泌體研究相對困難，需要盡快開發(fā)操作簡單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。

通過對28例前列腺ai癥患者和19例正常人尿液外泌體中的miRNA進行深度測序分析，發(fā)現(xiàn)兩種miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者組明顯下調(diào)，表明尿液外泌體中的特異性miRNA可能作為前列腺ai的新型生物標志物。Khurana等［100］將研究對象由miRNAs擴大至多種類型RNA，通過對慢性腎病患者尿液外泌體中各類RNA進行系統(tǒng)研究，在慢性腎病患者組中識別出30種明顯差異的lncRNAs，表明尿液外泌體中的lncRNAs具有作為慢性腎病早期診斷標志物的潛力。Skotland等的研究則表明尿液外泌體中的脂質(zhì)能夠作為前列腺ai的新型標志物，3種脂質(zhì)標志物結(jié)合使用能夠有效提高對前列腺ai的診斷靈敏度(93%)和特異性(100%)。

膜封閉的囊泡釋放到周圍環(huán)境中已經(jīng)成為近幾年來越來越受關(guān)注的問題。令人信服的證據(jù)表明囊泡可交換復(fù)雜的信息有助于這種興趣的興起。但是，也已經(jīng)清楚，不同類型的分泌囊泡共存，具有不同的細胞內(nèi)起源和形成模式，因此可能具有不同的組成和功能。外泌體是分泌囊泡的一種亞型。它們在真核細胞內(nèi)的多泡小體中形成，并且當這些多泡小體與質(zhì)膜融合時分泌到細胞外。有趣的是，不同的分子家族已被證明參與細胞內(nèi)形成外泌體及其隨后的分泌，這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細胞具有交換信息的功能。

結(jié)果表明，PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。應(yīng)用Tim4的外泌體強結(jié)合能力，可用ELISA或FACS高靈敏度定性檢測、定量分析外泌體。以前無法用超速離心法提取的微囊泡，也通過運用PS親和法實現(xiàn)高純度提取。本指導(dǎo)書中對該技術(shù)進行詳細說明，這項技術(shù)的有用性今后將受到世界各方評價，有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。外泌體的檢測和提取還遇到一個困難即：對各種外泌體的分類。研究人員尚未統(tǒng)一定義以何種方法提取的細胞外囊泡可以稱之為外泌體，給實驗數(shù)據(jù)的分析和重復(fù)性確認帶來困難。近年，隨著國際細胞外囊泡協(xié)會的成立、世界性研究者研討會的舉辦，提案MISEV指南作為國際標準，計劃或已經(jīng)開始進行EV研究的科學家請務(wù)必閱讀這些方針。外泌體可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化等方方面面。外周血外泌體提取試劑盒生產(chǎn)廠家

從外泌體中篩選的生物標志物，可用于疾病的診斷、預(yù)后及治理。外泌體的沉淀

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不寬泛。外泌體的沉淀