密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術(shù)。該方法需預(yù)先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構(gòu)筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構(gòu)建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會沉淀到底部。實際上，用PS親和法提取的人白血病細胞釋放的外泌體。黑龍江外泌體芯片

在過去十年中，細胞外囊泡已經(jīng)成為細胞間通訊的重要介質(zhì)，參與原核生物和高等真核生物細胞之間的生物信號傳遞，以調(diào)節(jié)不同范圍的生物過程。此外，細胞外囊泡的病理生理作用開始在包括癥狀、傳播性疾病和神經(jīng)變性疾病在內(nèi)的疾病中得到認識，突出了醫(yī)治干預(yù)的潛在新靶點。此外，未修飾和工程化的細胞外囊泡可能在大分子藥物遞送中具有應(yīng)用。該綜述回顧近在理解細胞外膜泡生物學(xué)和細胞外囊泡在疾病中的作用方面的進展，討論新出現(xiàn)的醫(yī)治機會并考慮相關(guān)的挑戰(zhàn)。尿液提取試劑盒成分外泌體及其攜帶的組分參與肝臟細胞的增殖、再生和遷移等生理過程，在肝臟疾病和肝損傷中起著重要作用。

液體活檢是一種非侵入性的血液檢測突破性技術(shù)，能早期快速地檢測中流及其病灶或者轉(zhuǎn)移過程中釋放到血液中的循環(huán)中流細胞（circulatingtumorcell，CTC）、循環(huán)中流DNA（circulatingtumorDNA，ctDNA）和中流外泌體等中流組分。中流外泌體作為液體活檢的一個重要組成，基于其內(nèi)容物成分多樣和穩(wěn)定等優(yōu)勢，正成為中流標志物相關(guān)研究的熱點。中流來源納米大小的外泌體具有易通過血腦屏障、天然的歸巢特性、雙分子層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和高效的生物相容性等特征。因此，中流外泌體正成為中流靶向zhiliao理想的載體，尤其是工程化外泌體更表現(xiàn)出很好的中流靶向干預(yù)和增強藥物zhiliao的效果。

Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻中介紹，通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進一步純化胎盤相關(guān)外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進行2次沉淀。經(jīng)過多次實驗反復(fù)驗證，確定同時表達外泌體標志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍。

外泌體大小不均可能是由于MVB的限制膜不均勻內(nèi)陷，導(dǎo)致流體和固體的總含量不同；細胞的微環(huán)境和固有的生物學(xué)特性可能會影響外顯體的含量及其生物學(xué)標記，如乳腺病細胞及其外泌體的蛋白質(zhì)組可以顯示來源細胞是上皮樣細胞還是間充質(zhì)樣細胞；由于細胞表面受體表達的不同，外泌體對受體細胞的影響可能不同，可能誘導(dǎo)細胞存活，也可能誘導(dǎo)凋亡，或誘導(dǎo)免疫調(diào)節(jié)等；異質(zhì)性也可以基于外泌體起源的組織，包括它們是否來自病細胞，瘤細胞產(chǎn)生的外泌體傳遞致瘤miRNAs明顯促進瘤細胞增殖。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物)、對受體細胞的功能影響以及細胞來源來區(qū)分。遼寧CD81外泌體慢病毒

外泌體的復(fù)雜性，為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標的診斷窗口。黑龍江外泌體芯片

尺寸排除色譜法是使用聚合物凝膠或類似的固定相柱進行外泌體分離的技術(shù),樣品以重力滴落的方式收集。流體力學(xué)半徑較小的樣品組分進入凝膠孔隙后,需耗費相對較長的時間通過凝膠柱,導(dǎo)致延遲洗脫,實現(xiàn)不同粒徑大小顆粒分離。尺寸排除色譜法可以與差速離心法結(jié)合而不會明顯損失外泌體,保證產(chǎn)量的同時可有效去除雜質(zhì)蛋白,更適合目標蛋白質(zhì)組學(xué)和miRNA的分析。靜水過濾透析法主要利用靜水壓力迫使樣品中不同特定大小分子先后通過透析管,其中溶劑和小溶質(zhì)很容易通過透析管,而較大的顆粒,如外泌體和其他囊泡,仍留在透析管中而被收集。黑龍江外泌體芯片