密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術。該方法需預先利用常用的梯度液介質(zhì)如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據(jù)密度梯度構建和沉降方式的不同,又可以分為速率區(qū)帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據(jù)顆粒的沉降速率分離,介質(zhì)密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區(qū)帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區(qū)帶,則會根據(jù)樣品液中各種溶質(zhì)成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區(qū)帶,而不會沉淀到底部。隨著今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰，并擴大臨床應用。北京CD81外泌體慢病毒

外泌體是細胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過三種方式介導細胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細胞相互作用,通過受體–配體作用黏附到靶細胞表面,隨后被內(nèi)吞入靶細胞,或直接將內(nèi)容物釋放到靶細胞內(nèi),從而激huo靶細胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產(chǎn)生的片段可以與靶細胞的細胞表面受體結合,從而激huo靶細胞;(3)外泌體還可以與靶細胞直接接觸發(fā)生膜融合,導致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉(zhuǎn)移到目標細胞,從而引起靶細胞的響應。通過介導細胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過程,比如消除胞內(nèi)陳舊分子、呈遞抗原、分化調(diào)節(jié)性T淋巴細胞或髓樣細胞以抑制免疫反應,而且還可以參與疾病形成的病理過程,如通過與受體細胞的相互作用傳播病原物質(zhì)、促進中流轉(zhuǎn)移過程中的血管生長和中流細胞遷移。血清提取試劑盒價錢外泌體作為核酸的藥物遞送載體。

獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態(tài)光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應用于外泌體顆粒數(shù)目和粒徑分布的測量，但兩種方法也各有不足。動態(tài)光散射法中散射光強度依賴于顆粒質(zhì)量(體積)，混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴重影響測量結果，因此動態(tài)光散射法更適用于單分散體系。而且動態(tài)光散射法所得的結果強烈依賴于所應用的數(shù)學算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進行檢測時，為了得到準確的濃度和粒徑信息，需要根據(jù)所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準，操作繁瑣。受檢測靈敏度所限，納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm～1μm的顆粒，粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外，兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進行分析，難以區(qū)分合成的納米材料、大蛋白質(zhì)聚合體和生物囊泡。

微流控芯片是一種可兼容多種外泌體分離方法的新興檢測平臺,這些方法包括免疫親和分離、膜過濾、納米線捕獲、聲納米過濾和確定性側(cè)向位移分選等。微流控裝置是由幾十到幾百微米的不同直徑微通道網(wǎng)絡組成的緊湊單元,能夠處理皮升到微升范圍內(nèi)的黏性介質(zhì)樣品;且根據(jù)特定的功能,微通道可以相互連接,使用額外的特定裝置來微調(diào)流體運動。微流控技術能夠以極高的準確性和特異性在微尺度上重現(xiàn)眾多實驗室過程,取代昂貴的設備,基于微流控技術的電化學外泌體檢測芯片已經(jīng)受到廣fan關注。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。

已經(jīng)有許多關于外泌體作用的報導，根據(jù)這些現(xiàn)象實驗中，從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體，在活內(nèi)是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。確認外泌體生理作用的單獨方法就是明確外泌體的釋放機制，通過促進或壓制釋放機制，分析會引起何種生理作用，這是進一步研究的發(fā)展方向。甚至活內(nèi)的外泌體動態(tài)（哪個外泌體遷移至何處）也會成為今后需要努力研究的重要課題。實際上，用PS親和法提取的人白血病細胞釋放的外泌體，其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較，PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上，幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白，回收量高，操作重復性好。幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白，回收量高，操作重復性好。pkh26

外泌體無法分析外泌體具有的生理功能，也是兩種提取方法的問題所在。北京CD81外泌體慢病毒

建立記錄各論文實驗條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一。一方面，隨著EV研究倍受世界矚目，各國啟動了大型研究項目。美國啟動NIH戰(zhàn)略性大型項目（ExtracellularRNACommunication），國際厲害性學會——Gordon和KeystoneSymposia也從2016開始成立會議小組。受到歐洲藥物研究開發(fā)公司“創(chuàng)新藥物倡議組織（IMI）”的支持推進的CANCER-ID項目，也包含EV研究在內(nèi)。2017年日本選定了EV研究為文部科學省研究開發(fā)戰(zhàn)略的目標之一，期待會加速今后的研究發(fā)展。無論如何，今后EV研究的根本就是必須有強有力的研究方法和技術，而PS親和法有望成為其中之一。北京CD81外泌體慢病毒

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