外泌體的提取分離方法:1、PEG-base沉淀法:聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產(chǎn)生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑。2、試劑盒提?。航鼛啄陙恚袌錾弦殉霈F(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,有的是通過特殊設(shè)計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm)。肌外泌體提升是什么
外泌體生物學功能:1、在心血管系統(tǒng)中,據(jù)報道,源自人胚胎干細胞(ESC)的間充質(zhì)干細胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統(tǒng)中,據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉(zhuǎn)移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制;3、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中,外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動,從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機理;迄今為止,尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細胞結(jié)合的途徑。然而,比較明顯,其結(jié)合過程從外泌體識別受體細胞PM上的特定受體開始。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導致相關(guān)信號通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,從而導致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細胞中。細胞上清外泌體PKH26突狀細胞釋放的外泌體可以強化殺傷性T細胞對癥狀細胞的特異性反應。
研究者利用電穿孔法對外泌體進行DOX的負載,進行體內(nèi)抗中流效果的研究。實驗結(jié)果顯示,負載DOX的iRGD肽靶向性外泌體對中流的抑制效果遠優(yōu)于單純的DOX。直接靜脈注射DOX,其不僅水溶性低,而且容易使DOX與血液中的蛋白結(jié)合,從而被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)識別捕獲,起不到理想的抗中流效果。而用iRGD肽靶向性的外泌體保護DOX,可以提高DOX水溶性,避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉,提高靶向性,從而降低由于用藥過量和非靶向性引起的毒性,起到更好的抗中流效果。
外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì),在體內(nèi)參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究,應選用血漿還是血清?答:血清是血液凝固之后收集的液體,所以其中少了纖維蛋白原,凝血因子,以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,具有凝血功能。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。高濃度集聚誘導細胞死亡的TNF-α,可使類風濕關(guān)節(jié)炎惡化。
外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動力學特性,它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力,外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道,并且通過生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復雜貨物的組成?;谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預后方面具有潛在的應用價值。疾病的進展和對診療的反應也可以通過外泌體的多組分分析來確定。外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,活躍細胞內(nèi)通路。galnac-l96-ps
隨著EV研究倍受世界矚目,各國啟動了大型研究項目。肌外泌體提升是什么
外泌體研究背景:胞外囊泡是從細胞膜上脫落或者由細胞分泌的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,主要由微囊泡、凋亡小體、外泌體組成。而外泌體是其中一類小囊泡,直徑為30~150nm,密度1.10~1.18g/ml,可攜帶核酸、蛋白質(zhì)質(zhì)和脂質(zhì)等,存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。越來越多的研究證實,外泌體可以通過細胞間轉(zhuǎn)移核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等特定物質(zhì),發(fā)揮特殊的功能。如在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中、肉瘤細胞發(fā)生了發(fā)展、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導過程中都發(fā)揮著重要作用。對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預后分析。肌外泌體提升是什么
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