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外泌體離心

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-04-07

外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體,是具有生物活性的脂雙層囊泡,大小約為30-100nm,由不同類型的正常細(xì)胞和瘤子細(xì)胞自然產(chǎn)生和釋放。這些囊泡在細(xì)胞間通訊中起重要作用,并影響細(xì)胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應(yīng)。外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細(xì)胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉(zhuǎn)運(yùn)至靶細(xì)胞。外泌體貨物的組成非常多樣化,包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子、細(xì)胞因子、細(xì)胞受體、脂質(zhì)以及不同的核酸,例如miRNA和環(huán)狀RNA。外泌體可以包含不同類型的細(xì)胞表面蛋白、細(xì)胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。外泌體離心

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外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡,其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體,但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞,調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng)。同時(shí),外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送。外泌體 定性膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號(hào)通路的活躍。

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外泌體的提取分離方法:1、超濾離心:由于外泌體是一個(gè)大小約幾十納米的囊狀小體,大于一般蛋白質(zhì),利用不同截留相對(duì)分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對(duì)樣品進(jìn)行選擇性分離,便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效,且不影響外泌體的生物活性,是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法:外泌體表面有其特異性標(biāo)記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn),但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實(shí)驗(yàn),難以普遍普及。

胞外囊泡和外泌體的異質(zhì)性。細(xì)胞外囊泡的兩大類是胞外體和外泌體。胞外體通過質(zhì)膜出芽釋放,大小在50~1mm之間。外泌體起源于內(nèi)泌體途徑,通過形成包含ILVs的ESEs、LSEs,較終形成多泡體。當(dāng)MVBs與質(zhì)膜融合時(shí),外泌體釋放(尺寸范圍~40~160nm)。外泌體是一個(gè)高度異質(zhì)性的群體,具有獨(dú)特的誘導(dǎo)復(fù)雜生物學(xué)反應(yīng)的能力。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小、含量(載物)、對(duì)受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來概念化。這些特征的不同組合導(dǎo)致了外泌體的復(fù)雜異質(zhì)性。外泌體的提取分離方法:PEG-base沉淀法。

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細(xì)胞攝取診療性外泌體:從樹突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用,包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對(duì)靶細(xì)胞的影響可能是通過不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來控制的。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合,從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中。外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動(dòng),從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)理。北京外泌體NTA

在免疫系統(tǒng)中,據(jù)報(bào)道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移是細(xì)胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機(jī)制。外泌體離心

眾所周知外泌體是供體細(xì)胞分泌出來的胞外囊泡,被受體細(xì)胞吸收后起到調(diào)控受體細(xì)胞功能,這篇綜述文章主要討論了外泌體的生成、生化性質(zhì)以及作為藥物遞送載體的潛力。外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、肉瘤的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不同的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì),且能靶向特定細(xì)胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。外泌體離心

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