外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。植物外泌體提取試劑盒銷售
內(nèi)化的外泌體和內(nèi)源性產(chǎn)生的外泌體的細胞旅程:外泌體可以通過不同的機制直接進入細胞。外泌體由細胞通過內(nèi)吞作用過程從頭生成。外泌體不斷地被細胞產(chǎn)生和吸收。它們可能是新生成的外泌體和消耗的外泌體的混合物。目前尚不清楚內(nèi)生性產(chǎn)生或消耗的外泌體是一起釋放還是單獨釋放。被吸收的外泌體會被溶酶體降解。進入細胞的外泌體可能進入或與已存在的ESEs融合,隨后解體并將其內(nèi)容物釋放到細胞質(zhì)中。另外,內(nèi)泌體可以與質(zhì)膜融合并在細胞外釋放外泌體。植物外泌體提取試劑盒銷售度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高。
外泌體生物學(xué)功能:1、在心血管系統(tǒng)中,據(jù)報道,源自人胚胎干細胞(ESC)的間充質(zhì)干細胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統(tǒng)中,據(jù)報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉(zhuǎn)移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制;3、在中樞的神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中,外泌體的作用是消除廢物并介導(dǎo)大腦活動,從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機理;迄今為止,尚未完全發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)外泌體-細胞結(jié)合的途徑。然而,比較明顯,其結(jié)合過程從外泌體識別受體細胞PM上的特定受體開始。膜受體的識別是外泌體細胞反應(yīng)的基礎(chǔ),它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內(nèi)吞作用,從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細胞中。從研究上來講并不太嚴格區(qū)分外泌體或微泡。
透射電子顯微鏡(TEM)和掃描電子顯微鏡(SEM)是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像,以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒,該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別,在SEM中,電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射,捕獲并檢測散射的電子,從而生成粒子圖像。但是,在TEM中,不與粒子相互作用的電子穿過樣品,并使用熒光屏進行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一,通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高,外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響;另外樣品的準備階段比較復(fù)雜,不適合進行大量快速的測量;而且由于樣本經(jīng)過了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程,對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞,從而影響觀察的效果,無法準確測量外泌體濃度。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體,生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等,可作為疾病診斷標記物、調(diào)控靶細胞功能、參與細胞生物學(xué)活動等。
外泌體的生物發(fā)生和鑒定。液體和細胞外成分,如蛋白質(zhì)、脂類、代謝物、小分子和離子,可以通過內(nèi)吞作用和質(zhì)膜內(nèi)陷,與細胞表面蛋白一起進入細胞。由此產(chǎn)生的胞腔側(cè)質(zhì)膜芽的形成表現(xiàn)為質(zhì)膜的外-內(nèi)取向。這一出芽過程導(dǎo)致芽的形成可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)、跨高爾基網(wǎng)絡(luò)(TGN)和線粒體預(yù)先形成的早期核內(nèi)體融合。ESEs也可以與ER和TGN融合,這可能解釋了內(nèi)吞物如何到達它們的。因此,一些ESEs可以包含膜和腔的成分,可以表示不同的起源。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調(diào)節(jié)蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內(nèi)蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。磁珠免疫法分離的外泌體,生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以普遍普及。體液提取試劑盒
外泌體的細胞源:人體中幾乎所有類型的細胞均能產(chǎn)生外泌體。植物外泌體提取試劑盒銷售
外泌體的提取、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)(電子顯微鏡技術(shù))、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),能比較好的保護其包被的物質(zhì),且能靶向特定細胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。腹水外泌體融合實驗外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,活躍細胞內(nèi)通路。植物外泌體提取試劑盒銷售
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